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实验 细胞膜的渗透反应 一、实验目的 1．了解细胞膜对物质通透性的一般规律: 细胞膜的渗透性及各类物质进入红细胞的速度。 2．了解溶血现象及其发生机制。 二、实验原理 细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜，可选择性控制物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就是渗透。渗透作用是细胞膜的主要功能之一。将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。将红细胞放在某些等渗盐溶液中，由于红细胞膜对某些溶质具有通透性，溶质可进入细胞内，导致膜内渗透压升高，胞外的水随之进入细胞内，发生溶血现象。因此，发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞进度的一种指标。本实验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料，将其放入不同的介质溶液中，观察红细胞的变化，判定红细胞对不同物质的通透性如何。 三、实验材料 鸡血 四、实验器材 50ml小烧杯、10ml移液管、试管（15ml）、试管架。 五、实验试剂 抗凝剂：肝素（5 μg/ml） 0.17M氯化钠 0.17M氯化铵 0.17M醋酸铵 0.17M硝酸钠 0.12M草酸铵 0.12M硫酸钠 0.32M葡萄糖 0.32M甘油 0.32M乙醇 0.32M丙酮 六、实验方法 （一）鸡红细胞悬液 以肝素液湿润5ml注射器内壁，推出多余的肝素液（针头内必须留下肝素液，不要进空气），取鸡的静脉血2ml左右。取50ml小烧杯一只，加一份鸡血和十份0.17M氯化钠溶液，形成一种不透明的红色液体，此即稀释的鸡血。 （二）低渗溶液 取试管一只加入10ml 蒸馏水，然后再加入1ml 稀释的鸡血，混匀，注意观察溶液的颜色变化，由不透明的红色逐渐澄清，红细胞发生破裂，造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。 （三）鸡红细胞的渗透性 1、取试管一只，加入0.17M氯化钠溶液10ml，再加入1ml 稀释的鸡血，轻轻摇动，注意是否有颜色变化？是否有溶血现象？为什么？ 2、取试管一只，加入0.17M氯化铵溶液10ml ，再加入1ml 稀释的鸡血，轻轻摇动，注意是否有颜色变化？是否有溶血现象？若发生溶血，记下时间（自加入1ml稀释鸡血到溶液变成红色透明澄清所需时间）。 3、分别在下列八种等渗溶液中进行实验，步骤同2。 （1）0.17M醋酸铵 （2）0.17M硝酸钠 （3）0.12M草酸铵 （4）0.12M硫酸钠 （5）0.32M葡萄糖 （6）0.32M甘油 （7）0.32M乙醇 （8）0.32M丙酮 七、注意事项 1．肝素用量要适宜，过少无抗凝作用，过多易导致溶血。 2．为了保证实验结果的精确性，应准确计时，并确定开始计时的标准和完全溶血的标准。 3．有的溶液不发生溶血，有的发生溶血时间比较长，可以将他们与对照组（氯化钠组）一起对比，如果发现有溶血现象但尚未完全溶血的说明该溶液可使血细胞发生溶血，只是时间未到，但是如果与对照无差别，说明它不会使血细胞溶血。 八、实验报告 将观察到的现象记录，并进行分析比较和讨论（填写表格）。 管号 处理 是否溶血 时间(单位) 结果分析 1 10ml氯化钠＋1ml稀释鸡血 2 10ml氯化铵＋1ml稀释鸡血 3 10ml醋酸铵＋1ml稀释鸡血 4 10ml硝酸钠＋1ml稀释鸡血 5 10ml草酸铵＋1ml稀释鸡血 6 10ml硫酸钠＋1ml稀释鸡血 7 10ml葡萄糖＋1ml稀释鸡血 8 10ml甘油＋1ml稀释鸡血 9 10ml乙醇＋1ml稀释鸡血 10 10ml丙酮＋1ml稀释鸡血 九、思考 1.红细胞在不同溶液中溶血时间为什么不同？ 2.试述细胞膜有哪些种跨膜运输的机制？  实验二 红细胞的计数 一、实验目的 掌握动物细胞计数的方法。 二、实验原理 细胞计数板是由特殊硬质玻璃载物片构成。计数板的中央部分有四条沟，形成三条隆起，两边较窄的隆起，是放置盖玻片用。中央较宽隆起部分，可有一个或两个计数室用来计数白细胞和红细胞。中央的隆起比两边的隆起低0.1毫米，因此盖上盖玻片，在这一间隙中充满红细胞稀释液时，其深度恰好为0.1毫米。其计数部分是由一个长3mm宽3mm深0.1mm的小室，其上被等分为9个大方格(其边长为1mm)，中间的大方格又用双线等分为25个中方格（其边长为1mm/5=0.2mm），每个中方格又被单线等分为个16小方格（小方格的边长为0.2mm/4=0.05mm）。计数时，通常选择计数室中央大方格四角和中央的五个中方格（每个中方格包含16个小格）来计数。 三、实