五芝液抗肿瘤作用的药理研究.docVIP

一、五芝液体内抗肿瘤作用与免疫调节作用 20世纪70年代，日本学者最先发现灵芝提取物和灵芝多糖体内给药对动物移植性肿瘤有显著的抑制作用，并提出灵芝的抗肿瘤作用是“宿主中介性的”，可能是通过增强机体的免疫功能而实现的。经一系列研究证明：灵芝提取物及其所含多糖肽灌胃可抑制小鼠移植性肿瘤S180、人肺癌（PG）、Lewis肺癌的生长，但直接加到体外培养的S180或人白血病细胞的培养液中，对肿瘤细胞生长无抑制作用。提示灵芝制剂在体内抑制肿瘤生长的作用确实是“宿主中介性的”，增强机体的抗肿瘤免疫力可能是其中重要的一环。 随后的研究证明，灵芝多糖肽可直接作用于单核巨噬细胞、树突状细胞和细胞毒T-细胞，增强其功能。促进TNF-αmRNA和IFN-γmRNA表达，增加TNF-α和IFN-γ生成，也促进IL-1和IL-6等细胞因子生成，增强细胞因子的活性，从而抑制肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，最终杀死肿瘤细胞。 在小鼠骨髓来源的树突状细胞（DC）体外培养体系中，加入灵芝多糖Gl-PS（0.8、3.2或12.8μg/ml）可明显促进DC表面DC11c及I-A/I-E分子的共表达、明显增加IL-12 40亚基mRNA和蛋白表达、促进DC诱导的混合淋巴反应（MLC），表明灵芝多糖能促进DC的成熟、分化和功能。在经P815肿瘤细胞裂解物冲击致敏小鼠骨髓来源的DC诱导产生的特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）模型，在冲击致敏阶段与不同浓度的灵芝多糖（Gl-PS）共培养，收集CTL及细胞培养上清液，以释放入CTL与P815肿瘤细胞共培养体系细胞培养上清液中的乳酸脱氢酶（LDH）活性代表CTL的特异性杀伤活性；同时用RT-PCR法检测CTL中IFN-γ及颗粒酶B的mRNA表达；用ELISA法检测细胞培养上清液中IFN-γ蛋白含量；用Western Blot法检测CTL表达的颗粒酶B的蛋白含量。 结果显示：当DC经P815肿瘤细胞冻融抗原冲击致敏后，其诱导产生的CTL对P815肿瘤细胞具有杀伤作用，灵芝多糖（Gl-PS）（0.8、3.2或12.8μg/ml）可增强此作用，使释放入培养上清液中的LDH活性显著增强。进一步研究发现，同上浓度的灵芝多糖可明显增加DC诱导CTL的IFN-γ蛋白含量增加。上述浓度的灵芝多糖还可明显增加DC诱导的CTL的颗粒酶BmRNA及蛋白表达。这些结果提示，灵芝多糖在DC成熟阶段，增强DC对肿瘤抗原的捕获、处理、递呈能力，增强DC诱导的特异性CTL的细胞毒活性。而灵芝多糖促进活化CTL的IFN-γ mRNA转录及蛋白表达，使IFN-γ生成增加，后者通过其直接和间接作用发挥抑瘤作用。颗粒酶参与促进CTL及NK细胞介导的细胞凋亡。颗粒酶家族中，以颗粒酶B功能最强。灵芝多糖促进CTL的颗粒酶B mRNA和蛋白质表达，与其增强CTL的细胞毒活性有关。 二、五芝液中灵芝多糖增强细胞因子诱导的杀伤细胞活性 继应用淋巴因子活化的杀伤细胞（LAK细胞）于肿瘤的过继免疫治疗之后，将人外周血淋巴细胞在体外与多种细胞因子共培养后，获得一群异质细胞即细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK），具有增值力强、杀瘤活性高、杀瘤谱广、对多重耐药肿瘤细胞同样敏感等特点，且明显优于LAK细胞，比LAK细胞更适合于肿瘤的过继免疫治疗。是新一代抗肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。有研究者按常规方法制备小鼠的CIK细胞[小鼠脾细胞培养中加入IFN-γ（1000kU/L）、抗CD3单抗（50mg/L）、IL-2（300Ku/L）和IL-1(100Ku/L)]，当培养中加入灵芝多糖（Gl-PS）（100和400μg/ml）后，可明显降低CIK细胞培养中的白介素-2（IL-2）和抗CD3单抗的用量（分别为未加灵芝多糖的对照组的75%和50%）。但与对照组相似，能诱导和大量扩增CIK细胞，且此CIK细胞在体外杀伤YAC-1和P815肿瘤细胞的杀伤率亦与常规对照组无明显差异。同样将此CIK细胞静脉输注给荷S180或荷H22肝肉瘤小鼠后，其体内抗肿瘤疗效与常规CIK细胞治疗组比较亦无差异。研究者还发现，灵芝多糖在降低抗CD3单抗和IL-2用量50%和75%的条件下，能促进CIK细胞颗粒酶B以及穿孔素mRNA和蛋白的表达。这表明灵芝多糖通过增加颗粒酶B和穿孔素的表达，从而增强CIK细胞杀伤肿瘤细胞的活性。研究者的试验还证明，淋巴细胞表面的补体3型（CR3）受体介导灵芝多糖对CIK细胞的作用。? 关于免疫细胞上灵芝多糖作用的受体还有一些研究。Chen 等研究发现，灵芝多糖（F3）结合巨噬细胞膜上TLR受体后，通过蛋白酪氨酸激酶PTK/PLCγl/蛋白激酶C（PKC）/丝裂原激活的蛋白激酶1(MEK1)/胞外信号调节激酶(ERK)，PTK(Sac)/Racl/PAK/p38和PIK/Racl/PAK/J