医学类毕业论文：葡萄球菌耐药机制的研究.docVIP

目录 摘 要 2 1抗 菌 药 物 研 究 综 述 3 1.1前言 3 1.2材料与方法 4 2主动外排系统介导的鲍曼不动杆菌耐药机制研究 9 2.1结果 11 3结论 16 4材料 17 4.1材料 17 4.2培养基 17 5方法 19 5.1细菌复苏鉴定 19 5.2药敏检测 19 5.3抗菌药物分类 19 6 54株鲍受不动杆菌体外药敏情况 21 6.1 16种常用抗菌药物药敏情况 21 6.2 26种为AdeB蛋白底物的抗菌药物药敏情况 22 6.3 5种AdeJ底物的药敏情况 22 6.4 2种氟哇诺酮类抗菌药物的药敏情况 23 结论 24 参考文献 25 摘 要 目的：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌主动外排耐药机制的研究及主动外排系统介导的鲍曼不动杆菌耐药机制研究。 方法：收集昆明医学院第一附属医院临床分离鲍曼不动杆菌54株，采用K一B法检测其对21种抗菌药物的药敏情况;用PCR方法扩增鲍曼不动杆菌外排泵编码基因adeB、adeJ、abeM的片段;荧光RT一PCR法检测外排系统基因mRNA的表达水平，采用分子克隆方法制作绝对定量标准品进行荧光定量，并分析外排系统基因mRNA的表达水平与该菌耐药性的关系。 收集2005年至2008年三年期间本院ICU病房感染的金黄色葡萄球菌(SA)，通过苯唑西林-琼脂稀释法和mecA基因检测法，从102株SA中筛选鉴定出80株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)，琼脂稀释法测定21种抗菌药物MRSA菌株的最低抑菌浓度(MIC)，观察药敏结果；通过计算机Primer Premier 5.0软件设计norA、qacA、qacB、qacJ 4种主动外排基因的引物，进行聚合酶链反应(PCR)扩增，将产物琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像分析系统摄像保存，并分析结果；将质子泵抑制剂奥美拉唑按一定比例加入到喹诺酮类药物左氧氟沙星中，进行协同抑制试验，测定药物主动外排基因阳性的MRSA的MIC值，分析试验前后药敏结果的变化。 结果：1、鲍曼不动杆菌的耐药检测的结果: 16种常用抗菌药物药敏结果显示:庆大霉素(GEN)、甲氧节淀/磺胺甲恶哇(SXT)、呱拉西林(PIP)、头抱曲松(CRO)、四环素(TCY)、头抱他淀(CAZ)、头抱唆肪(CTX)、妥布霉素(TOB)、阿米卡星(AMK)的耐药率高达 70%左右，而对亚胺培南(工MP)、美洛培南 (MEM)、头抱呱酮/舒巴坦(CSL)，仍保持较高的敏感性，其耐药率均低于巧%。54株鲍曼不动杆菌耐5类抗菌药物菌株巧株(27.8%)、耐4类药菌株15株(27.8%)、耐2类药菌株9株(16.7%)、耐l类药菌株9(16.7%)、敏感株6株(11.1%)。 2、金黄色葡萄球菌的耐药检测的结果 1.收集本院ICU病房中住院患者感染的102株金黄色葡萄球菌(SA)中，源自住院患者有96例，源自医护人员双手携带有6例；苯唑西林-琼脂稀释法检出MRSA78株，检出率为76.5%，mecA基因检测法检出MRSA80株，检出率为78.4%；且从MRSA感染患者年龄构成比可以看出，以年龄≥60岁、合并有多种疾病的患者多发。 2.所检出的MRSA对万古霉素和替考拉宁的敏感性均为100.0%，而对其他19种抗生素(苯唑西林、青霉素、头孢呋辛、头孢噻肟、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、头孢西丁、亚胺培南、哌拉西林三唑巴坦、阿奇霉素、红霉素、氯霉素、克林霉素、阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星、加替沙星、环丙沙星)均耐药。 3.PCR扩增法检出80株MRSA中的4种主动外排基因norA、qacA、qacB、qacJ分别为54株、12株、17株、9株，检出率分别为67.5%、15.0%、21.2%、11.2% 结论： 1、ICU患者感染MRSA严重，加强医护人员手的卫生对于预防MRSA的医院内感染较为重要。 2、 MRSA呈现多重耐药性，仅对糖肽类抗生素表现敏感，对其他常见类抗菌药物菌耐药，并出现2株对万古霉素敏感性处于中介值的菌株。 3、 MRSA中存在norA、qacA、qacB、qacJ主动外排基因，以norA基因居多，其次为qacB，而qacJ检出率相对较低。 4、 泵抑制剂奥美拉唑可抑制MRSA对于喹诺酮类抗生素的主动外排作用，为临床治疗MRSA感染提供一种新的思路。 5、鲍曼不动杆菌耐药形式严峻;其临床分离株普遍存在外排泵编码基因adeB、adeJ和abeM;主动外排泵AdeABC和AbeM可能是鲍曼不动杆菌发生耐药的机制之一。 关键词：鲍曼不动杆菌 多重耐药 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 主动外排 奥美拉唑 1抗 菌 药 物 研 究 综 述 1.1前言 1.1.1耐甲氧西林金黄色葡萄球菌主动外排耐药机制的研究 感染是重症监护病房(ICU)住院患者常见的并发症之一，也是