Biacoretrade;生物传感器对流感病毒及HCP的定量分析.pdfVIP

GE Healthcare 应用指南28-9771-57 AB 疫苗 Biacore™ 生物传感器对流感病毒及HCP 的 定量分析 Biacore 生物传感器技术在流感疫苗研究中 胞蛋白的混合多克隆抗体的ELISA 法。这些 被用于病毒血凝素（HA ）及宿主细胞蛋白 方法都有一定的局限性：Bradford 总蛋白检 （HCPs ）的定量。对流感病毒的精确定量通 测法不敏感而且特异性不够强，无法检测调 过抑制分析实现，而HCP 浓度则是通过直 控临界极限水平以下的蛋白；ELISA 法中使 接结合分析来进行测定。与单向免疫扩散 用纯化多克隆抗体可以增强敏感性和特异 性，但是却耗费人力。 （SRID）方法相比较，HA 方法显示出较高 的灵敏度、精确度及回收率。此外，这种方 Biacore 生物传感器分析法与这些当前使用的 法还缩短了所用的分析时间。HCP 方法与 方法相比，可以显著改善病毒和HCP 定量分 Bradford 总蛋白检测法相比也显示了较高的 析。 灵敏度和特异性。使用Biacore 系统所进行 的检测分析可以显著的提高疫苗研发和生产 材料与方法 操作，有可能作为现有检测方法的补充甚至 Biacore T200,Typhoon™可变模式成像仪， 替代。 ImageQuant™ TL 软件, 传感器芯片CM5, Amine Coupling Kit(氨基偶联试剂盒), 表面活 简介 性剂P20, HBS-EP+ 缓冲液(10 mM 在疫苗生产中，病毒浓度及HCP 杂质的定量 HEPES,150 mM NaCl,3 mM EDTA, 0.05% 表 对制定最终配方尤为重要。大部分流感疫苗 面活性剂P20), 50 mM NaOH,Cy™3 荧光染料, 及琼脂均来自GE Healthcare 。Zwittergent™ 是在鸡胚中生产的，但是出于对于新的大规 来自Merck , BSA 来自Sigma-Aldrich 。 模流行性感冒的担忧，企业开发出了基于在 Bradford 溶液来自BioRad 。平板计数器来自 细胞培养系统中生产疫苗的方法。与此同 Molecular Probes 。除了B/Brisbane/3/2007 血 时，企业也需要更好的分析工具来缩短研制 清及抗原来自Solvay Pharmaceuticals 之外， 周期。本应用报告中描述了一种使用生物传 其他血清及病毒抗原均来自国家生物标准与 感器技术对感冒病毒 （1）及HCP 进行定量 控制研究院(NIBSC) 。重组全长HA 蛋白来自 分析的新方法。 ProspecBio(A/H1N1/New Caledonia/20/99)、 Genway (A/H3N2/Wyoming/ 3/2002)及Protein 流感疫苗的效力一般通过使用免疫化学方法 Sciences (B/Jilin/20/2003)。 定量HA 而进行测定。以往最常用于这种分 析的方法是经过美国食品药品监督管理局