等温滴定量热仪和差示量热仪在生物制剂研发中的应用.pdfVIP

等温滴定量热仪和差示扫描量热仪在生物制剂研发中的应用 液剂中蛋白药物的稳定的一个重要因素是适当 的辅料的选择，适宜的辅料浓度能够在延长药物保质期的同时 确保患者的最高的用药安全。尽管过去十年间的文献报道了维持稳定性的一般准则，但是在存储期间辅料如何提升 蛋白药物的稳定性，其机制尚未完全明晰。为能合理优化蛋白制剂，掌握有关蛋白-辅料相互作用机理的知识十分 重要。 通过微量热技术来研究来探索蛋白-辅料的相互作用，因而被越来越多的应用于生物制剂的研发和优化。通过使用 等温滴定量热仪（ITC）和差示扫描量热仪（DSC）等技术，评估与相互作用有关的热力学参数，例如辅料-蛋白的 结合，辅料参与下蛋白质伸展等，揭示研发最优制剂所需的重要机理信息。 这里我们列举两个 ITC 和 DSC 是怎样辅助蛋白制剂研发的例子。在第一个例子中，使用 ITC 揭示了聚山梨酯 80 （常用表面活性剂，通过降低蛋白表面吸附和聚集以稳定蛋白性质）与蛋白X （ProX）之间的相互作用。使用单位 -1 点模型拟合 ITC 数据计算得出结合亲和常数（KA ）=1430 ±260 M ，结合焓（△H）=-6.3±1.1 kcal/mol，每个 ProX 分子结合位点数（n）=2.6±0.3。另外一个例子中，使用 DSC 和 ITC 产生的数据集显示在抗菌防腐剂，苯酚存在的 条件下，ProX 在 pH5.7 时结构最稳定。因而在上述两个研究中，来自于 GE Healthcare 生命科学部的等温滴定量 热仪 ITC200 和差示扫描量热仪 VP-Capillary DSC 在探寻制备 ProX 最佳制剂方法方面提供了非常重要的信息。 由于蛋白质分子内在的不稳定性，包括物理不稳定性（伸展、聚集、吸附）和化学降解性（氧化、脱酰胺、断裂）， 以基于蛋白质的治疗发展面临着巨大的挑战。蛋白的不稳定可以导致蛋白活性降低甚至可能产生潜在的免疫原性。 为增加蛋白的稳定性，可以尝试改变蛋白所在溶剂的性质，包括选择缓冲液系统，调节 pH 值，添加辅料/添加剂， 即研发最佳剂型。 选择适当的赋形剂并优化赋形剂浓度是蛋白药物的溶剂稳定性的一个重要因素，可以增加用药的安全性并延长保质 期。因而蛋白药物制剂研发的一个重要环节是赋形剂的选择，需满足以下条件，合适的溶解度，无毒，可维持蛋白 结构的完整，保证较长的保质期，以及保持产品的生物活性。这样的辅料包括氨基酸、盐、金属、表面活性剂、糖， 多羟基化合物和聚合物。可作为稳定剂，表面活性剂，抗菌防腐剂或抗氧化剂。赋形剂的稳定作用通常是蛋白特异 性并呈现浓度依赖性。 、 在辅料选择环节，不仅要进行辅料浓度的优化，也要了解各种制剂组分间的相互作用。每种赋形剂选择和赋形剂浓 度的优化需要进行大量的制剂筛选和稳定性研究，是十分费工的工作。过去十年间文献报道了维持稳定性的一般准 则（1），但是在存储期间赋形剂是如何提升蛋白药物的稳定性，其机制尚未完全明晰。了解赋形剂与蛋白相互作 用的机理，可以减少纯经验的筛选方法，从而理性研发和优化蛋白制剂，减少蛋白产品研发过程中的时间消耗和材 料损耗。另外，掌握蛋白-赋形剂相互作用强度及种类的信息有助于预测蛋白药物在体内的表现。 生物物理学分析技术在制剂研发的赋形剂筛选中发挥极其重要的作用。特别是微量热仪，被视为评估蛋白稳定性和 相互作用的最有效方法之一，其允许系统完全的热力学表征，检测过程可逆。微量热研究用于探索蛋白-赋形剂的 相互作用，该相互作用已经越来越多的用于生物制剂的研发和优化。微量热仪的工作原理是通过检测结合、解离和 /或伸展过程中热能的改变，从而决定大分子相互作用的热力学和化学计量学。ITC 主要用于确定热力学结合参数， 例如结合亲和常数和解离常数，以及化学计量学，焓，熵以及等温条件下的 Gibbs 结合自由能。它也被用于在一定 温度范围内的实验中确定结合过程的热容量改变。 DSC 数据提供蛋白伸展的热力学参数，包括中位伸展温度，焓， 熵，Gibbs 自由能以及伸展过程的热容量改变。这些热力学参数常用于比较不同制剂中蛋白稳定性或决定特定赋型 剂的相对稳定或不稳定效果。 例 1 ITC 图谱研究蛋白质与赋形剂间的相互作用 例 2 DSC 图谱研究蛋白质在不同缓冲体系稳定性 、