色谱的定性和定量分析.docVIP

第三章 色谱的定性和定量分析 概述:色谱法分离好,定性难(tR定性) tR与分子结构有关,但两者间相关规律远未阐明.因为色谱信息少,响应信号缺乏典型的分子结构特征不能鉴定未知的新的化合物,只能鉴定已知的化合物。 仪器调试 色谱分析分三个阶段： 操作条件选择 定性定量---保留值定性(通常采用tR,Vg等) ---峰高,峰面积定量 第一节 定性 一．保留值定性 1.纯样定性 依据：色谱条件严格不变时，任一组分都有一定的保留值，此法的可靠性与分离度有关。例如峰很多，靠的很近（酒、茶叶、石油等）用tR定性不准。则可以选用叠加法，加入纯样看哪个峰增加。对于一根柱子上有相同保留值的组分可采用双柱定性。 双柱定性：一根极性柱，一根非极性柱。 若二根柱上tR未知与tR已知都吻合，则定性可靠性就增一倍 纯样定性优点：简单 缺点：要有纯样，适用于已知物，操作条件要稳定 2.相对保留值定性 优点：比绝对法重现性好 缺点：也需要纯样，比绝对法麻烦 3.用比保留体积Vg定性 优点：不用纯样 缺点：计算复杂，要求准确称出固定液重量。如果固定液流失，则定性不准。 4.利用保留值规律定性 a.碳数规律 logVg=A1n+B1 b.沸点规律（对同分异构体） logVg=A2Tb+B2 c.柱温规律 I=A3+B3 d.双柱规律 I=A4+B4I/（I、I/是组分在二种不同极性固定液色谱柱上的保留值） 研究发现：大部分同系物的保留值的对数值与沸点、分子量、密度、黏度、折光指数、燃烧热、生成热等物理常数的对数值之间基本成线形关系。 所以可借助色谱法来测定这些物理常数。 二.用保留指数定性 优点：测得Ix值与文献值对照就可定性。 缺点：1. 要有正构烷烃纯样。 2. 可供查阅的文献值太少。 3. LC不能用柯瓦指数。测柯瓦指数时，柱子与柱温要与文献规定相同 三.选择检测器定性 选择检测器定性只对某类或某几类化合物有信号。 例如：FID对有机物响应，对某些无机物不产生信号（H2O、H2S）。 ECD对电负性强的物质有响应。 FPD对S、P化合物讯号大。 四.联用 GC – MS GC - FTIR(傅立叶变换红外光谱) GC - NMR 缺点：标准谱图太少，一般用计算机检索 第二节 定量 一.峰面积 对高斯峰：A=1.065 W1/2*h 二.定量校正因子f 为什么要用f？ 是因为不同组分有不同的响应值 三.定量方法 定量方法主要有归一法,内标法,外标法 这些定量方法各有其优缺点,在不同情况下要选择不同的方法,否则会带来必然误差 1、归一法 若(对同系物)校正因子近似相等 则可用峰面积归一化公式(即面积百分比法) 优点:∵是相对法∴与进样量无关,定量较准确 缺点:要求 全出峰(样品所有组分都要出峰) 全知峰(有所有组分的标准品) 2、外标法(标准曲线法) 用待测组分的纯样制标准曲线 单点校正法(配一个样): 配制一个与被测组分含量(Wi%) 十分接近的标样Ws% 定量进样测得As,标准曲线过原点,再进同样体积的未知样测得Ai 用Ai:As=Wi%:Ws% ,求Wi% 两点校正曲线(配两个样) 有斜率f1,截距f2 例如:四点校正曲线 在分析含2~3% CO2气体样品时 可选用含1%,2%,3%,4%标准CO2 气体进样1ml ,测得峰面积,作出 标准曲线,然后进1ml被分析CO2 样品,从标准曲线查出其含量 外标法优点：快速简单,只要待测组分出峰且完全分离即可 缺点：属绝对法,要求进样量,操作条件不变 多点校正要配系列标样 3、内标法(外加标准法) 被测物不能全出峰或只需测混合物中某几个组分时可采用内标法 方法是:准确称取样品,加入一定量内标物,根据被测物和内标物的重量及相应峰面积求出某组分的含量 一般选内标物为基准,则fs=1 对内标物的要求:a.内标物峰要靠近被测峰,但又要完全分离 b.要有内标纯样,称样要准 c.与样品互溶,内标物量要接近被测组分含量 内标法步骤：a.选内标物 b.测fw(i/s) (fi) c.称未知样W.加内标物Ws,测Ai,As 内标法优点:是相对法,不要求全出峰,全知峰 缺点:要有内标物纯样,两次称重,比较麻烦 总结： 归一法与内标法:是相对法，与操作条件无关，所以误差小 外标法:简单，是绝对法，与操作条件有关