DNA印迹法和实时定量PCR法在端粒长度测定中的应用比较.pdfVIP

北 京 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) JOURNAL OF PEKING UNIVERSITY (HEALTH SCIENCES) Vol． 45 No． 2 Apr． 20 13 ·297 · · · 技术方法 DNA 印迹法和实时定量PCR 法在端粒长度测定 中的应用比较 △ ， ， 高凌云 李国栋 童坦君 ( ， ， 100191) 北京大学基础医学院生物化学与分子生物学系 北京大学衰老研究中心 北京 ［ ］ : DNA PCR 。 摘 要 目的 分析并比较测量端粒长度的 印迹法和实时定量 法在细胞衰老实际研究中的性能 方 : (population doublings ，PDs) (2BS) DNA ; 法 从不同代数 的正常人成纤维细胞 中提取基因组 作为测试样本 对测量端 DNA PCR ， 粒长度的 印迹法和实时定量 法进行优化 以点杂交的方式分析地高辛配基标记检测系统的特异性和灵 ; 。 敏度 分别用两种方法反复测定同一样本的平行样或不同样本并分析比较两种方法测量端粒的分辨率和精确度 : ， 1 g DNA ， 4 ～ 5 g ; 结果 实际测量端粒时 地高辛配基标记检测系统虽可检测出小于 μ 的基因组 但最优样本量为 μ DNA 150 bp ， PCR 300 ～ 400 bp ， 2 PDs 印迹法的分辨率约为 实时定量 法的分辨率约为 前者可分辨代龄相差少至 的 2BS ， 5 PDs ; PCR 细胞端粒长度的差异 而后者只能分辨代龄相差 以上的端粒差异 实时定量 法重复测量误差超过 10% ， DNA 2 ． 5% (P ＜ 0 ． 001)。 : DNA 远大于 印迹法的 结论 地高辛配基标记的 印迹检测系统完全适用于测量端粒 ， PCR ， ， ， ， 长度 且性能优于实时定量 法 但后者方便快捷 可高通量处理样本 所以在细胞衰老研究中 应根据具体情况 合理选择相应方法。 ［