整合素连接激酶在烧伤创面愈合过程中的表达和作用研究.pdfVIP

整合素连接激酶在烧伤创面愈合过程中的表达和作用研究 专 业：烧伤整形美容外科学 硕士研究生：李 罡 导 师：李叶扬 中文摘要 研究背景： 创面愈合是各种急慢性创伤治疗的最终目的 ，在这个复杂的生物学过 程中，涉及了多种组织细胞、胞外基质成分以及各种调控因素的参与。目前对于 创面愈合的确切机制尚未完全阐明，创面修复的效果尚不能令人满意。创面愈 合的分子机制是近年来学者们研究的热点，如能在基础理论方面深化对创面愈 合分子机制的认识 ，就可能为治疗提供新的思路，对提高创面愈合的速度 和质量具有重要意义 。 胶原 、纤维连接蛋白 （Fibronectin, Fn ）等细胞外基质(extracellular matrix, ECM) 在创面愈合过程中的作用近年来受到国内外学者的广泛关 注 。它们在创面中一方面起着填充和支架作用 ，另一方面ECM 还能通 过作用于细胞膜上的整合素受体 ，通过整合素信号通路来调节细胞的增 殖 、迁移 、凋亡等细胞生物学功能 。整合素连接激酶(integrin-linked kinase， ILK)是近年来新发现的一种胞内蛋白激酶，它是整合素通路的关键激酶。除了介 导整合素通路的信号传导外，ILK还能通过PINCH作用于生长因子信号通路，介 导整合信号通路和生长因子通路的相互作用，另外ILK还在调节细胞骨架蛋白的 合成、组装等方面起着重要作用。 目前国内外学者关于ILK的研究主要集中在肿瘤和组织纤维化疾病的发生、 发展过程，也有学者发现ILK在参与了肝脏、心肌、神经等组织器官损伤后的修 复过程，但ILK在皮肤创面愈合过程中的作用和机制国内外尚未见相关研究。故 本研究以探讨ILK在创面愈合过程中的作用和机制为目的，首先通过观察ILK在 创面愈合过程中的表达情况了解ILK是否参与创面愈合的过程，并且进一步研究 TGF-β 对ILK表达的调控作用、ILK对创面收缩和创面ECM合成的影响，试图初 1 I 步探讨其在创面愈合过程中的作用机制。 第一章 ILK在SD大鼠皮肤烫伤创面愈合过程中的表达研究 目的 探讨大鼠烫伤创面愈合过程中ILK和β1整合素的表达以及在创面愈合 中的作用 方法 健康雌性SD大鼠18只，随机选取其中15只作为实验组，建立深Ⅱ度烫 伤模型，另外3只为对照组，不做处理。实验组分别于烫伤模型建立后第1、5、 10、15、20天随机选取3只大鼠，切取背部两侧全层创面，运用免疫组织化学的 方法检测创面中ILK、β1整合素的表达。对照组取背部正常皮肤作为对照。 结果 烫伤后第5、10、15天大鼠烫伤创面中ILK的表达明显高于烫伤前和愈 合后(P ＜0.05) ；创面中β1整合素的表达在烫伤后第5天明显高于烫伤前(P ＜0.05)， 烫伤后第10、15天则明显高于烫伤前和愈合后(P ＜0.05﴿ 。 结论 ILK、β1整合素在大鼠创面愈合过程中表达明显增加，ILK可能通过参 与整合素信号通路，在调节创面细胞的增生以及细胞与ECM相互作用中扮演着 重要的角色。 第二章 TGF- β 对人皮肤成纤维细胞中 ILK表达的调控作用研究 1 目的 探讨转化生长因子 β (TGF-β )对人皮肤成纤维细胞中ILK 表达的调控作 1 1 用。 方法 7 例人正常皮肤标本采用组织块法分离培养人皮肤成纤维细胞，选取第 4-6 代状态良好的细胞，TGF-β 组给与 TGF-β (5ng/ml)刺激，同一成纤维细胞作为 1 1 对照，运用倒置相差显微镜观察细胞的形态变化，荧光标记的免疫细胞化学方法 检测第 24 、48 、72 小时各组细胞中 ILK 的表达。 结果 随着刺激时间的延长，TGF-β 组细胞中 ILK 的表达逐渐增加，第 48