单分散亲水性树脂的制备及其应用.pdfVIP

第十一届全国离子色谱学术报告会论文集 浙江杭州.2006.11.28-30 19 单分散亲水性树脂的制备及其应用 龚波林，强克娟，任丽，马桂娟，卜春苗 (宁夏大学能源化工重点实验室, 宁夏银川，750021) 以单分散树脂为基质的高效液相色谱填料具有优良的分离性能，尤其对提高色谱柱效、 增强色谱柱的穿透性和保持生物大分子活性非常有利。目前，无论是Ugelstad 1]发明的“两 步种子溶胀聚合法”制备的各种类型聚合物微球[2,3]，还是改进的“一步种子溶胀聚合法” 制备的交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球[4]，都采用线性聚苯乙烯为种子制备的，但聚苯乙 烯种子疏水性强对生物大分子会产生不可逆吸附。 本文在我们已有对单分散树脂的研究[5-8]基础上，首次采用分散聚合法制备亲水性聚甲 基丙烯酸环氧丙酯种子及 “一步种子溶胀聚合法”制备了 5.0µm大孔单分散亲水性的交联 聚甲基丙烯酸环氧丙酯（PGMA/EDMA ）微球，进一步以该微球为基质采用新的化学改性方法制备 了一系列色谱固定相，用于生物大分子的分离纯化，取得较好的效果。 1. 采用分散聚合方法，制备了单分散的亲水性微球，系统地研究了单体浓度、引发剂用量、 稳定剂用量、反应温度和时间等各种聚合参数，对聚合产物粒度及其分散性的影响。在优化 反应条件的基础上，制备出低分子量粒径在 1.5~7.0 μm 范围内的单分散微球。 2. 以3.4 μm 单分散线性微球为种子，将种子溶胀聚合技术与高分子溶液致孔技术相结合， 采用一步种子溶胀聚合法成功地制备了颗粒单分散并具有大孔结构的交联聚甲基丙烯酸环 氧丙酯微球（PGMA-EDMA ）。首次用凝胶渗透色谱法较深入地研究了交联度、惰性小分子致孔 剂和高分子溶液致孔剂浓度等因素对PGMA-EDMA微球孔径、孔径分布的影响，筛选出了一种 孔径分布范围较宽的微球作为体积排阻色谱介质用于五种标准聚苯乙烯样品的分离。 3. 以孔径分布范围合适的PGMA/EDMA微球为基质，键合甘油、季戊四醇、二乙醇胺、δ-葡萄 糖酸内酯等含有多羟基一类小分子化合物进行亲水化改性反应。选择出亲水性良好的改性树 脂，用于三种蛋白质和一种肽混合样的体积排阻色谱（SEC ）分离。 4. 以大孔单分散交联PGMA/EDMA 为基质，采用新的化学改性方法制备了的弱阳离子交换 （WCX ）、中强阳离子交换（MCX ）和强阳离子交换（SCX ）三种类型新型性能优异的离 子交换色谱填料。详细考察了每种填料的离子交换特征、标准蛋白的分离性能、酸碱稳定性、 表面亲水性能、盐浓度、盐种类、负载量以及pH值对保留的影响，结果表明所合成的填料 完全符合蛋白在阳离子交换色谱上的保留规律。将三种填料应用于生物工程产品的分离纯 化，结果满意。 5. 以单分散交联PGMA/EDMA树脂为基质，采用新的改性方法设计合成了三种弱阴离子交换 （WAX ）、两种强阴离子交换（SAX ）色谱填料。依据每种改性方法的亲水性程度及蛋白的 质量回收率，初步解释了填料的分离性能差异。选择性能优异的WAX和SAX填料用于基因 工程产品重组人粒细胞- 巨嗤细胞集落刺激因子（rhG-CSF ）和重组人干细胞因子（rhSCF ） 的分离纯化，取得较满意的效果。 6. 以单分散大孔交联PGMA/EDMA树脂为基质，采用新的化学改性方法合成了邻二醇配基和苯 基配基两种新型疏水色谱填料。两种填料分离性能优良，动力学吸附容量高于TSK gel和连 续棒状的HIC填料。首次以邻二醇疏水填料为介质，可一步复性及同时纯化 7mol/L盐酸胍提 7 IU/mg 。 取的重组人干扰素- γ，干扰素- γ的纯度高达到90% 以上，比活达5.3 ×10 7. 以单分散大孔交联PGMA/EDMA树脂为基质，以氨基葡萄糖为配基，制备了亲水性好，耐压 性高，吸附容量大的氨基葡萄糖高效聚合物亲合色谱填料，将其应用于粗品Con-A的分离纯 第十一届全国离子色谱学术报告会论文集 浙江杭州.2006.11.28-30 20 化，从纯度仅为 15%提高到 95% 。 参考文献 [1] Ugelstad J.. J. Pol