磷酸盐对人胎盘碱性磷酸酶胍变性的影响.pdfVIP

第 40 卷　第 2 期 青 岛 大 学 医 学 院 学 报 Vol. 40 , No. 2 2004 年 6 月 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE QIN GDAO UNIVERSITATIS J une 　2004 磷酸盐对人胎盘碱性磷酸酶胍变性的影响 李 　馨 (青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室 , 山东 青岛　266021) ( ) [摘要] 　①目的 　观察磷酸盐对人胎盘碱性磷酸酶 HPAP 胍变性的影响 ,为酶活性部位的柔性理论提供证 据。②方法 　应用分光光度法测定有磷酸盐及无磷酸盐存在时 ,HPAP 在胍变性过程中的活力变化。③结果 　低 ( ) 浓度的盐酸胍 0. 5 mol/ L 使变性平衡态酶活力增强 ,在有磷酸盐存在时 ,酶活力增加的更为明显 ; 随着盐酸胍 浓度的增加 ,酶逐渐失活 ;当盐酸胍浓度 2. 0 mol/ L 时 ,酶活力迅速下降 ; 当盐酸胍浓度为 3. 0 mol/ L 时 ,酶活力 完全丧失。但有磷酸盐存在时 ,盐酸胍浓度达到 5. 0 mol/ L 时 ,酶活力才完全丧失。④结论 　磷酸盐对 HPAP 胍变 性有保护作用 ,提示磷酸盐降低了酶活性部位的柔性。 [ 关键词] 　磷酸盐类 ;碱性磷酸酶 ;胎盘 ;变性 ;胍 [ 中图分类号] 　Q566 　　[文献标识码] 　A 　　[文章编号] (2004) EFFECT OF PHOSPHATE ON GUANIDINE DENATURATION OF HUMAN PLACENTAL AL KALINE PHOSPHATASE 　L I Xi n (Department of Biochemistry and Molecular Biology ,Qingdao University Medical College ,Qingdao 266021 , China) ABSTRACT 　Objective 　To study the effects of phosphate on guanidine denaturation of human placental alkaline phosphatase ( HPAP) and provide a theoretical basis for flexibility hypothesis of enzyme active sites. 　Methods 　Spectrophotometry was used to de termine the changes of activity of HPAP during guanidine denaturation in the presence and absence of phosphate. 　Results 　The guani dine of low concentration ( 0. 5 mol/ L) increased the activity of HPAP in the denaturationequilibrated state , even markedly with the presence of phosphate. The enzyme was gradually inactivated with the increase of the guanidine concentrations , and rapidly decreased when the guani