凝血酶效价测定及制备工艺的研究.docVIP

吉林省高等教育自学考试吉林大学 生物制药专业本科毕业设计 设计题目:凝血酶效价测定及制备工艺的研究 设计作者: 完成时间:准考证号:工作单位: 联系电话: 吉林大学生命科学院年月 6 日 摘 要 目前,凝血酶的应用范围正日渐扩大,由单纯的局部外敷发展到外科手术、耳鼻喉、口腔、妇产、泌尿及消化道等部位出血止血,亦可作为外用止血药物的重要原料,其止血效果优于“对氨基苯甲酸”、“止血环酸”、“止血敏”等通过注射后须经血管收缩而其止血作用的药物,故深受广大用户欢迎,将广泛用于临床。凝血酶在止血的生化药理中起到最关键的作用,至今没有任何其它天然或人工合成的物质能取代凝血酶的生化作用和重要地位。由于该药使用日渐广泛,将使目前十分紧俏的凝血酶更趋紧缺,因此生产前景看好。凝血过程的关键是凝血酶,凝血酶原在人体内可通过内源性和外源性两条途径被激活,激活后它可催化纤维蛋白原的分解,使每一分子纤维蛋白原从N-端脱下四段小肽,转变成为纤维蛋白原单体,然后相互联结,物质在激活的纤维蛋白原稳定因子的作用下形成牢固的纤维单摆多聚体,即不溶于水的血纤维。凝血酶还可激活纤维蛋白稳定因子,使其更多更快地参与凝血过程。凝血酶是一种高效快速局部止血药品,能缩短创伤愈合时间的40%,有促进上皮细胞的有丝分裂而加速创伤愈合的作用。而凝血酶的活性决定伤口愈合的时程。本文即采用倾斜试管法对凝血酶效价进行测定。 关键词:纤维蛋白原、凝血酶标准品、标准曲线、 凝结时间、凝血酶效价、制备工艺 目 录 前言..(1) 凝血酶效价测定及制备工艺(2) 结果与讨论……………………………(10)参考文献………………………………(15)致谢……………………………………(16) 前 言 凝血酶是机体凝血系统中的天然成分,在体内以凝血酶原形式存在,在一定条件下凝血酶被激活并转化为有活性的一种蛋白质水解酶。凝血酶的活性不足或消失都会影响凝血酶起效的快慢。因此对凝血酶效价检测是非常重要的。但目前在我们国内尚很少有关于凝血酶测定的报道,因此本文着重阐述效价的测定的方法和根据已有的制备冻干粉的经验方法,对凝血酶的制备工艺进行研究。 一、凝血酶效价测定 1 材料与方法 1.1材料 1.1.1仪器设备 HW-2型透明恒温水浴锅天津大学无线电厂 MS1/MS2迷你振荡器广洲仪科实验仪器有限公司 PHS-3B精密PH计 上海雷磁仪器厂IV型微量移液器中外合资上海求精生化试剂仪器有限公司 移液管 天津玻璃仪器厂 小试管天津玻璃仪器厂 FA2004电子天平上海天平仪器厂 秒表 北京市亚光仪器有限公司 101A-2干燥箱上海市实验仪器总厂 YB-2型澄明度检测仪天津大学精密仪器厂 钛滤器 福尔公司 FCM 40-D冷冻干燥机德国莱宝公司 0.45um浸水性滤膜 美国颇尔公司 1.1.2试剂 氯化钠分析纯 沈阳化学试剂厂 硝酸银分析纯 沈阳化学试剂厂 磷酸氢二钠或磷酸二氢钠 分析纯 沈阳化学试剂厂 凝血酶 天津川页生物制品有限公司 右旋糖苷40天津川页生物制品有限公司 甘露醇 广西南宁化学制药责任有限公司 活性炭 上海活性炭厂有限公司 1.1.3样品 凝血酶 规格:500IU/mL Xx有限公司生产 纤维蛋白原(牛血)由中国药品生物制品检定所提供 凝血酶标准品(每支含740国际单位) 由中国药品生物制品检定所提供 2实验方法 2.1溶液的制备: 2.1.1纤维蛋白原凝固物含量的测定:取在105℃干燥至恒重的称量瓶,称其重量为18.8098g,加入纤维蛋原0.0301g后,加入1.5mL,0.9%氯化钠溶液溶解后,加入3.0单位的凝血酶标准品溶液0.1mL,快速摇匀,室温放置约1小时至完全凝固,用纯水洗涤至洗出液加硝酸银试液不产生浑浊。在105℃干燥3小时称取重量为18.8276g,纤维蛋白原含凝固物的含量为(18.8399-18.8276)÷0.0301 ×100%41% 2.1.2纤维蛋白原溶液的制备:取纤维蛋白原试剂,快速捣碎,称取0.1693g制成含0.2%凝固物的纤维蛋白原溶液需要用0.9%氯化钠溶液0.1693×41%÷0.2%34.7065mL。先加入少量的0.9%氯化钠溶液将纤维蛋白原搅成糊状后,再定容至34.7065mL,搅匀,取出少量测定PH值为7.27(7.0-7.4),若测得溶液的PH值小于7.0用0.05moL/L磷酸氢二钠溶液调节PH值至规定范围内;若溶液的PH值大于7.4则用0.0