水母雪莲愈伤组织超低温保存条件的初探.pdfVIP

第2 卷 第6 期 过 程 工 程 学 报 Vol.2 No.6 2002 年 12 月 The Chinese Journal of Process Engineering Dec. 2002 水母雪莲愈伤组织超低温保存条件的初探 陈书安, 王晓东, 赵 兵, 王玉春 ( 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京 100080) 摘 要：初步研究了水母雪莲愈伤组织的超低温保存方法. 结果表明，预培养、保护剂、预处理、 冰冻后处理对愈伤组织存活率都有一定影响. 水母雪莲愈伤组织预培养基为添加5%二甲基亚砜的 MS 培养基，优化的冰冻保护剂是15%二甲基亚砜+15%乙二醇+30%甘油的0.4 mol/L 蔗糖液，冰 o o o 冻保护剂的预处理温度是15 C，时间为10 min ，解冻温度25~35 C ；在25 C 水浴中用含1.2 mol/L 蔗糖的MS 溶液反复洗3 次，每次10 min. 用TTC 法测定细胞存活率可达58.5%. 关键词：水母雪莲；超低温保藏；愈伤组织 中图分类号：Q949.714 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2002)06−0539−05 1 前 言 雪莲系菊科(Compositae)菜蓟族(Trib. Cynreae Lee)凤毛菊属(Saussurea spp )雪莲亚属或雪兔子 亚属多年生草本植物，是我国3 类珍稀保护植物[1]. 雪莲中含有黄酮、生物碱、多糖等多种药用成 份，具有抗炎、抗癌、抗疲劳等功效，可以治疗风湿性关节炎、月经不调、高山不适应等症[2]. 雪 莲在我国甘肃、青海、西藏、新疆等地区均有分布，一般生长于海拔4 000 m 以上的高山流石滩上， [3] 在自然条件下生长缓慢，人工种植困难，长期的掠夺性采挖，已经使雪莲成为濒危物种 . 应用细胞培养技术进行雪莲细胞培养既可以满足临床上对雪莲药物的需求，又保护了自然资 源，维护了生态平衡[4]. 但是在组织培养中发现雪莲细胞容易变异，造成黄酮类物质含量下降. 超 o [5] 低温(−196 C)冰冻保存是解决种质退化和防止自然积累性突变的一种有效途径 ，但传统的超低温 保存需要昂贵的程序降温仪器，步骤繁琐[6]. 完全玻璃化是低温保存的一种新方法，即在高浓度保 护剂下，细胞连同保护剂于快速降温中都进入玻璃化状态，避免胞内外冰晶形成，使器官和组织 各部分都进入相同的状态，比其它超低温保存方法具有设备简单、程序简单和冻存效果好等优点， [7, 12] 在保存器官和组织的结构完整性方面有独到之处 . 本工作采用一种简便的玻璃化途径，初步研究了水母雪莲(Saussurea medusa Maxim)愈伤组织 的超低温保存，为雪莲种质保存研究奠定了基础. 2 材料与方法 2.1 实验材料 水母雪莲愈伤组织(本实验室诱导) ，在加0.5 mg/L 6−BA 和2 mg/L NAA 的MS 固体培养基[8] 上继代培养，取培养15 d 或20 d 的愈伤组织为实验材料. 2.2 实验方法 2.2.1 预培养 将培养 15 d 的水母雪莲愈伤组织转接于含5%二甲基亚砜的MS 固体培养基上，预培养5 d 备 收稿日期：2002−04−27 ，修回日期：2002−06−11 作者简介：陈书安(1973−) ，男，山东省淄博市人，博士研究生，生物化工专业. 540 过 程 工 程 学 报