印楝细胞悬浮培育系的建立及悬浮培育.pdfVIP

维普资讯 林 业科学 研 究 2003，16(5)：568～574 ForestResearch 文章编号 ：1001．1498(2003)05．0568．07 印楝细胞悬浮培养系的建立及悬浮培养 梁 军，魏 刚，吕 全，贾秀贞，张星耀 (中国林业科学研究院森林生态与环境保护研究所 ，北京 100091) 摘要：研究了印楝细胞悬浮培养系的建立及印楝细胞悬浮培养的条件。结果表明，印楝细胞悬浮系的 建立以 培养基 ，NAb_2．0～ 4．0nlg·L一，采用直接倾倒法作为接种方法为好 ；基于生物量、印楝素 含量和印楝素产率综合分析认为，印楝细胞悬浮培养的最佳条件为 培养基 ，NAb_2～4nag·L～，蔗 糖30g·L一，培养温度25℃，及根据培养容器的大小选择合适 的转速和装液量。 关键词：印楝 ；细胞悬浮培养 ；印楝素 ；植物源农药 中图分类号 ：Q943．1 文献标识码 ：A 印楝 (，4d ／ndc／aA．Juss)是当今世界上著名的农药资源植物n~引，以其独特的杀虫效 果和高效的杀虫、拒食、趋避、毒杀和不育等活性[3居于植物源农药资源的首位，对200余种昆虫 具有生物活性，主要表现在强烈的拒食作用，是迄今为止人们发现的最强拒食剂，如0．02mg·m-2 的印楝素就足以阻止沙漠蝗 (h／stocercagregaro／．(Forska1))的侵食 ；印楝素能有效地扰乱昆虫的 胚后发育，通过扰乱昆虫的内分泌使得幼虫脱皮、化蛹不正常而导致死亡；有效的绝育作用，如对 于产卵量大特别是社会性害虫如白蚁(Coptotemle~spp．)等，使用印楝素防治效果尤为显著[4]。印 楝素(_Azadiraehtin)是其主要的生物活性物质。印楝原产南亚的阿萨姆和缅甸或巴基斯坦、斯里 兰卡、泰国、马来群岛和印尼，我国 1986年在海南省万宁县引种栽培取得成功b]，1995年，在云 南省元江和元谋两地引种栽培印楝，也取得很大成功n]。现在我国海南、广东、云南有一定数量 的栽培。鉴于印楝在我国栽培的地域局限性 ]，规模化开发印楝活性物质需要开辟新的途径。 而植物细胞悬浮培养以其繁殖规模大、速度快为优势是生产有效物质的一种有前途的途径和手 段 l【0J，从 70年代以来，植物组织培养进展很快，有许多被用于次生代谢产物为 目的的经济价值较 高的植物已进行了组织培养，如人参 (Panax n C．A．Mey)、紫草 (Ameba／euchroma(Royle) John,st)等。印楝愈伤组织培养和植株再生也获得了成功[1 。本研究则希望针对印楝农药的生 产，寻求合适的印楝资源开发途径和方法。 1 材料与方法 1-1 材料 印楝为中国林科院资源昆虫所筛选的7号木。愈伤组织来 自于茎源经固体培养基上多次 继代诱导产生的生长旺盛、色泽嫩黄、疏松易碎的组织。 收稿 日期：201／2．10-25 基金项 目：“十五”攻关课题 “林木病虫害环境协调性农药及其航空喷洒技术研究”(2001BA509BI201)的部分内容 作者简介 ：梁军(1963-．)，男，宁夏中卫人，副研究员，博士 ． 维普资讯 第5期 梁军等：印楝细胞悬浮培养系的建立及悬浮培养 569 1．2 悬浮培养系的诱导 将约 2g的疏松易碎的愈伤组织接种到盛有40mL液体培养基(MS和 )的 100mL三角 瓶中。接种后置于旋转式摇床振荡培养，摇床转速为 120r·min一，温度25℃。 初次液体培养愈伤组织生长旺盛，摇匀培养液后稍置片刻 ，用颗粒适中的悬浮细胞团进行 继代培养，悬浮细胞团颗粒较均匀后，换用2OO～ 250mL三角瓶装 60mL液进行培养，再继而 用500mL三角瓶装 120mL液培养 ，以进行悬浮培养系的诱导。将悬浮起来的细胞悬浮液，轻 轻摇匀 ，静置片刻后接种到新鲜培养基中，进行悬浮细胞的继代培养 ，视细胞生长情况而决定 继代的间隔时间。 1．3 悬浮培养系的建立 1．3．1 培养基对悬浮系建立的影响 取生长旺盛、疏松易碎的印楝茎源愈伤组织 ，接种到附 加有 NAA4．0mg·L +队 0．