实验十二穿山龙中薯蓣皂苷元的提取、分离、鉴定.docVIP

实验四 穿山龙中薯蓣皂苷元的提取分离及鉴定 薯蓣皂苷元俗称薯蓣皂素，存在于薯蓣科（Diocoreaceae）植物中，含量约为1～3％。我国薯蓣科植物资源丰富，种类亦多，分布南北各地，其中作为薯蓣皂苷元生产原料的植物主要有盾叶薯蓣（Dioscorea zingiberesis C.H.Wright）俗称黄姜、穿山薯蓣（D．nipponica Makino）俗称穿山龙，用其根茎作为原料提取薯蓣皂苷元。 薯蓣皂苷属甾体皂苷，水解可得薯蓣皂苷元，这种甾体皂苷元，是近代制药工业中合成甾体激素和甾体避孕药的重要原料。 本实验以穿山龙为原料提取薯蓣皂苷元。穿山龙中含有多种甾体皂苷，根据其水溶性分为水溶性皂苷和水不溶性皂苷。总皂苷水解可得薯蓣皂苷元，其含量可达1.5～2.6％。 [目的要求] 1、掌握甾体皂苷元的理化性质。 2、掌握甾体皂苷元（亲脂性、中性成分）的提取分离方法。 3、掌握甾体皂苷元的检识方法。 [实验原理] 薯蓣皂苷（dioscin）为无定形粉未或针状结晶，mp288℃。可溶于甲醇、乙醇、甲酸，难溶于丙酮和弱极性有机溶剂，不溶于水。薯蓣皂苷元（diosgenin）为白色粉末，mp204～207℃， -129。 （C＝1.4三氯甲烷）。可溶于有机溶剂及甲酸中，不溶于水。 薯蓣皂苷元在植物体内与糖结合成苷，经水解（酸水解、酶水解）可得薯蓣皂苷元和糖。利用薯蓣皂苷元不溶于水，溶于有机溶剂的性质，用石油醚连续回流提取，将其从原植物中提取出来。 薯蓣皂苷元 D－葡萄糖 L－鼠李糖 薯蓣皂苷 [实验内容] 一、预试验 在研究天然药物或中药化学成分时，应首先了解其所含化学成分类型，以便选择一种适当的提取分离方法，这就需要进行化学成分的预试验。预试验分系统预试验和单项预试验。系统预试验旨在全面检查各类成分，单项预试验则是重点检查某类成分，本试验即选择此法。要寻找含皂苷的天然药物或中药，可单纯进行皂苷的试验，具体试验方法采用泡沫试验和溶血试验。 1．泡沫试验 取穿山龙粗粉1g，加水浸泡（1：10）1小时或置80℃水浴上温浸30分钟，过滤得滤液供以下试验。 取供试液2ml于试管中，紧塞试管口后猛力振摇，试管内液体则产生大量的持久性的似蜂窝状泡沫（示有皂苷）。 注：含蛋白质和粘液质的水溶液虽也能产生泡沫，但不持久，放置很快消失。 2．溶血试验 取2％血球悬浮液1ml，加生理盐水8ml，再加用于泡沫试验滤液1ml，混合均匀后放置，几分钟内溶液由红色混浊变成红色透明，产生溶血现象（示有皂苷）。 （注：此试验可同时作空白对照以比较现象更为明显。操作方法相同，只以生理盐水lml代替供试液即可）。 二、薯蓣皂苷元的提取、分离 穿山龙粗粉（50g） 置圆底烧瓶中，加水250ml、浓H2SO 420ml， 室温浸泡24小时，文火加热回流4～6小时， 放冷，倾出酸水液 酸性药渣 用清水漂洗3次，然后将药渣倒入 乳钵中，加Na2CO3粉末，反复研 磨调PH至中性、水洗、抽干 中性药渣 低温（80℃）干燥12小时 干燥药渣 置乳钵中研成细粉，置索氏提取器中， 以石油醚（60-90℃）为溶剂，连 续回流提取4-5小时。 石油醚提取液 回收石油醚至剩10-15ml，迅速倾入 小三角烧瓶中、放置使充分冷却，滤过 滤液 沉淀 用少量冷石油醚洗二次，抽干 薯蓣皂苷元粗品 无水EtOH或CHCl3-MeOH（9：1）重结晶 薯蓣皂苷元精品 进行结构改造 各种不同的甾体药物 三、薯蓣皂苷元的鉴定 1．物理常数的测定：测定熔点和旋光。 2．化学检识 （1）） 1