GDNF 重组腺病毒的构建及促进多巴胺能神经元存活的研究.pdfVIP

第 15 卷第 1 期 中国生物化学与分子生物学报 V o l. 15,N o. 1 1999 年 2 月 Ch inese Jou rnal of B iochem istry and M o lecu lar B io logy Feb. , 1999 GD NF 重组腺病毒的构建及促进 多巴胺能神经元存活的研究 徐国恒　凌　雁　万　有　王晓民 　韩济生 (北京医科大学神经科学研究所, 卫生部神经科学重点实验室, 北京 100083; 河南医科大学病理学系, 郑州 450052) 摘要　利用体内同源重组原理, 构建了能介导 GDN F 基因转移和表达的复制缺陷型重组腺病毒 A dCM V gdnf, 其中 GDN F cDNA 插入腺病毒基因组的 E 1 区并由CM V 启动子控制在人 293 细胞 内通过同源重组包装生成重组腺病毒后, 用形态学方法、病毒 酶切分析、 和 等 DNA PCR R T PCR 方法进行鉴定正确. 经测定病毒滴度达到 1010 . 用免疫沉淀方法从重组腺病毒感染的 293 细 pfu m l 胞及其培养基上清中均检测到大量 GDN F 蛋白. 用重组腺病毒直接感染或者用其条件培养基处 理, 分别使胚胎大鼠中脑原代多巴胺能神经元的数目增加 882% 和 96 4% , 明显增加多巴胺能神 经元存活, 对帕金森氏病基因治疗具有重要意义. 关键词　胶质细胞源性神经营养因子, 重组腺病毒, 基因转移, 基因治疗, 帕金森氏病 - D evelopm en t of the Recom binan t GD NF adenov irus and Observa tion of its Protective Effects on Pr imary Cultured D opam inerg ic + Neuron s aga in st Neurotox in M PP , , , 　 XU Guoheng L IN G Yan W AN You W AN G X iaom in HAN J isheng ( , , 100083; N eu roscience R esearch Institu te B eij ing M ed ical U nive