单克隆抗体的研究进展与应用前景.pptVIP

单克隆抗体的研究进展与应用前景 第一小组 组长：蔡静怡 PPT制作：蔡静怡 吴霞飞 组员：庄友超 沈敏娜 蔡静怡 吴霞飞 单克隆抗体的定义 动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，具有不同基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成效应B细胞和记忆B细胞，大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液中。如果能选出一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体。 单克隆抗体的特性 高度特异性 高度的均一性和可重复性 弱凝集反应和不呈现沉淀反应 对环境敏感性 单克隆抗体的优点与局限性 优点 ： 在体外“永久”地存活并传代 用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法 可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗 局限性 ： 固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围反应强度不如多克隆抗体 制备技术复杂、费时费工、价格较高 进一步人源化 人源化单抗与鼠单抗相比所具有的优点 1.特异性较强 2.不易发生过敏反应 3.在人体内维持的时间较长 4.可制备用于人的抗独特型抗体 检验医学的诊断试剂 作为检验医学实验室的诊断试剂，单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点，广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术。并且单克隆抗体的应用，很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。目前，应用单克隆抗体制作的商品化试剂盒广泛应用于： ①病原微生物抗原、抗体的检测； 　　 ②肿瘤抗原的检测； 　　 ③免疫细胞及其亚群的的检测； 　　 ④激素测定； 　 ⑤细胞因子的测定。 　 蛋白质提纯—配体（层析作用） 单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质（如Speharose 2B、4B、6B等）上，并制备成层析柱。当样品流经层析柱时，待分离的抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合，其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后，改变洗脱液的离子强度或pH，欲分离的抗原与抗体解离，收集洗脱液便可得到欲纯化的抗原。 小分子抗体的应用 定义： 分子量较小但具有抗原结合功能的分子片段 优点： 分子量小,穿透性强,抗原性低 不含Fc段，不会与带有Fc段受体的细胞结合，不良反应少 可在原核系统表达及易于基因工程操作 半衰期短，有利于及时中和及清除毒素 应用： 用于肿瘤的导向治疗 肿瘤的影像分布 基因治疗 细胞内抗体： 在细胞内表达 特异性识别某一基因产物 可干扰该基因产物的生物活性 研究基因结构与功能的关系 肿瘤的体内显像诊断 —单链抗体排除速度快，穿透力强，在肿瘤组织中的分布指数较完整抗体分子高 — 放射显像时，放射性核素排除较快，对身体危害 程度小，显像的本底较低 —理想的显像定位诊断载体 病毒的诊断和抗病毒感染 血液性疾病的诊断 —白血病的免疫诊断及分型 双特异抗体的应用 在体外免疫检测中的应用 自身红细胞凝集试验 快速检测HBV和HIV病原体等 避免化学交联减低两者的活性，从而提高酶免 疫检测的敏感度 用双特异抗体作为二抗，检测限达1ng/ml 在体内肿瘤放射免疫显像诊断中的应用 方法： 双特异抗体的一只臂结合靶抗原，一只臂结合半抗 原螯合剂，后者可选择性地与放射性核素结合，利用二次导向系统显示 特点： 更高的的灵敏度和清晰度 * 单克隆抗体的介绍 单克隆抗体药物的研究进展 单克隆抗体的应用前景 B淋巴细胞 1.小鼠免疫 2.细胞融合 注射特定抗原 单克隆抗体制备过程示意图 B淋巴细胞两两融合 B淋巴细胞和瘤细胞融合　 瘤细胞两两融合 ４.生产单克隆 抗体 3.筛选杂交瘤 细胞 两两融合 体外培养 单克隆抗体 注射到小鼠 体内 获得某个杂交瘤细胞 培养骨髓瘤细胞 选择培养基上培养 获得杂交瘤细胞 重构抗体 表面重塑技术 将鼠抗体的互补决定区（CDR）移植到人抗体的相应部位，这样人源化程度可达90%以上 将鼠抗体的互补决定区（CDR）移植到人抗体的相应部位，这样人源化程度可达90%以上 采用人－鼠杂交瘤技术、人－人杂交瘤技术、EB病毒转化技术、EB病毒转化－杂交瘤技术、DNA重组技术等 单克隆抗体的应用 检验医学的诊断试剂 蛋白质的提纯 小分子抗体的应