监测实验室环境标本高致病性禽流感监测技术方案.pptVIP

NDM-1基因的检测与确认 NDM-1简介 一个新发现的耐药基因，全长826bp 编码1型新德里金属β-内酰胺酶 造细菌成对碳青酶烯类药物耐药 位于质粒上 最初发现在肺炎克雷伯杆质粒pKpANDM-1上 Genbank FN396876 （2009.11.24） 具有可移动性 可在不同种属细菌间转移 革兰阴性：肠杆菌科、不动杆菌、假单胞菌 革兰阳性：？？ E.coli Genbank AB571289 （2010.07.10） NDM-1的基因检测 PCR检测 序列测定——最终确认 检测对象： 已经过表型筛检的菌株进行NDM-1基因确认 对大批菌株直接进行筛检 对标本的检测 高通量、快速、准确 PCR检测方法——模板制备 模板制备：菌株、标本 菌株 （1）G-细菌： a. 水煮模板：新鲜培养物悬浊于100-200μl纯水 沸水浴10min以上 8000rpm以上离心5min 吸取上清，-20 ℃保存 b. 试剂盒提取基因组DNA（说明书） PCR检测方法——模板制备 菌株 （2）G