钙激活酶激活蛋白基因的克隆及其在原核生物中表达及条件的优化.pdfVIP

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2017-09-14 发布于湖北
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第21卷第2期激光生物学报 VOJ．21NO．2 B10LOGYSINICA Apr．2012 2012．年4月 ACTALASER doi：10．3969／j．issn．1007-7146．2012．02．012 钙激活酶激活蛋白基因的克隆及其在原核生物中表达及条件的优化尹淑琴，常泓4，范艳，朱宏，梁娟 (山西农业大学生命科学学院，山西太谷030801) 摘要：构建钙激活酶激活蛋白基因(UKll4)的原核表达载体并优化其表达条件，为其高效表达提供试验依据。以UKll4cDNA为模板，通过PCR方法扩增钙激活酶激活蛋白基因，将其克隆到原核表达载体pGEX-4T一3 中，酶切及测序鉴定重组体。将构建好的重组质粒转化大肠埃希菌B121(DE3)，用IPTG进行诱导表达，在保持菌种不改变的前提下，分别改变IPTG的浓度、培养时间、菌体浓度、培养温度等来优化表达条件。结果显示， 40 kD的GST—UKl14融合蛋白。在IPTG浓度为0。3mmol／L，诱导温度为32℃，诱导时间为4h，菌体密度OD。。o UKl 14生物学活性及产品开发提供了试验基础。关键词：钙激活酶激活蛋白；原核表达；条件优化中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1007—7146(2012)02-0156-06 of ActivatorGeneandthe CloningCalpain OptimizedExpression Conditionin Prokaryotes YIN Juan Hong4．FANYan．ZHUHong，LIANG Shuqin，CHANG ofLife (CollegeSciences，ShanxiAgriculturalUniversity，Taigu030801，Shanxi，China) in for aimofthe was to the Abstract：The activator(UKl prokaryotes study designedoptimizeCalpain 14)expression into vector effective UKl14cDNAwasobtainedRT—PCR．andclonedprokaryoticexpression high expression．The by recombinantvector 4T-3-UKll4was transformedintoE．coliBL21 14，then constructed，and pGEX-4T-3-UKl pGEX 14wasinducedwith andcharacterized．There—