生防链霉菌Men-myco-93-63 nsdB_（mgh）基因的克隆及序列分析.pdfVIP

第 34卷第 5期 河 北 农 业 大 学 学 报 Vo1．34NO．5 2011年 9月 JOURNALOFAGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI Sep ．2011 文章编号 ：1000—1573(2011)05—0053—06 生防链霉菌 Men—myco一93—63nsdBmgh 基 因的克隆及序列分析 冀红柳 ， 胡亚亚 ， 沈凤英 ， 李亚宁 ， 刘大群 (1．河北农业大学植物保护学院，河北省植物病虫害生物防治工程技术研究中心，国家北方 山区农业工程技术研究中心， 河北 保定 071001；2．河北北方学院，河北 张家 口 075000) 摘要 ：为了获得生防链霉菌 Men-myco一93—63中 nsdB基 因，根据天蓝色链霉菌 A3(2)负调控基 因nsdB序列设 计引物 ，扩增 Men-myco一93—63基 因组 DNA，获得 1121bp的片段 ，经 NPA-PCR对其两端进行延伸 ，拼接后得 到 2073bp的全长序列 ，命名为 nsdB~ 。经 Southern杂交验证 ，该基因在玫瑰黄链霉菌 Men-myco一93—63基 因 组 中确实存在且为单拷贝。该基 因在 Men-myco一93—63中的发现与克隆，为生防菌的遗传改造和菌株代谢调控 途径 的研究提供 了重要依据 。 关 键 词 ：生防链霉菌；nsdB；基因克隆；NPA—PCR；序列分析 中图分类号 ：$432．1 文献标志码 ：A Cloningand sequenceanalysisof J[；嘲Jlgeneof biocontrolStreptomycesM en。。myco。_93-_63 JIHong-liu．，HU Ya-ya ，SHEN Feng—ying ，LIYa—ning ，LIU Da-qun (1．CollegeofPlantProtection，AgriculturalUniversityofHebei，Baoding071001，China；BiologicalControlCenterofPlant DiseasesandPlantPestsofHebeiProvince；NationalEngineeringResearchCenterforAgriculturein NorthernMountainousAreas，Baoding071001，China；2．NorthUniversityofHebei，Zhangjiakou075000，China) Abstract：InordertoobtainthegeneofbiocontroStreptomycesMen—myco一93—63，the1121bp genefragmentsequencesofgenomeDNA ofM en-myco——93——63wereamplifiedbytheprimerse。_ quencesdesignedbyS．coelicolorA3(2)．Andthen，nonspecificprimeranchoredPCR (NPA— PCR)wasusedforextendingthisfragment．AfterassemblingthewalkingsequenceandtheO— riginalsequence，thefull—length sequencewasobtainedwith 2 073bp，whichwasnamedas genensdB．~^．ThensdBmghgenewasfurtherconfirmedbySouthernblottest，andtheresult showedthattherewasonecopyofnsdB．~^geneinMen—myco一93—63．Thedetectionandcloning ofnsdB．~^genewillprovidean impo