鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的原核表达及生物学活性分析.pdf

畜牧兽医学报 2009，40(5)：725—729 ActaVeterinariaetZootechnicaSinica 鸡粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子的 原核表达及生物学活性分析 谭 兵 ，王红宁 ，张 毅。，张安云。，樊汶樵 (1．四JlI农业大学 动物 医学 院，雅安 625014； 2．四川大学 生命科学院 四川大学 “动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室”，成都 610064) 摘 要 ：通过 PCR方法扩增不含信号肽的鸡 GM—CSF成熟蛋 白基 因，克隆至原核表达载体 pET一32a(+)，构建原 核表达质粒 p32GM—CSF，通过 IPTG诱导重组鸡 GM—CSF蛋白表达 ，经镍离子亲和层析纯化后 ，用 MTT法检测表 达重组蛋 白的生物学活性，并制备兔抗鸡 GM—CSF多克隆抗体 。结果表明成功地构建了p32GM—CSF原核表达质 粒 ，SDS结果显示表达的重组蛋 白约 34ku，主要 以包涵体形式表达 ，纯化后得到高纯度 目的蛋 白。West— ernBlot结果表 明