乙型肝炎病毒X基因真核表达载体的构建.pdfVIP

检验医学2012年 11月第 27卷第 11 文章编号 ：1673．8640(2012)114)921-o4 中图分类号 ：Q5o3 文献标志码 ：A 乙型肝炎病毒 X基因真核表达载体的构建 李晓斐 (青岛市传染病医院检验科 山东青岛266033) 摘要：目的 构建含有乙型肝炎病毒(HBV)X基因的真核表达载体，并对其表达进行鉴定。方法 用聚合 酶链反应 (PCR)方法扩增x基因序列 ，对pcDNA6(+)载体及x基因PCR产物双酶切并转化大肠杆菌DH5c~，筛 选阳性克隆，并对其进行双酶切和测序鉴定，构建 HBVX基因真核表达载体pcDNA6(+)一HBx。以多聚乙烯酰 胺 (PEI)法将其转染到HepG细胞 ，WesternBlot鉴定 目的蛋白。结果 pcDNA6一HBx酶切后 ，琼脂糖电泳可见到 HBx基因片段，经序列测定其含有完整的x基因片段；WesternBlot结果显示 pcDNA6(+)一HBx能在 HepG细胞 中表达x蛋白。结论 成功构建了真核表达载体pcDNA6(+)一HBx，并能在HepG细胞中表达x蛋白，为进一步 研究HBVX基因与慢性乙型肝炎及肝癌的关系提供便利条件。 关键词：乙型肝炎病毒；X基因；真核表达 EstablishmentofhepatitisBvirusxgeneeukaryoticexpressionvector L／Xiaofei． (DepartmentofClinical Laboratory，QingdaoInfectionDiseasesHospital，ShandongQingdao266033，China) Abstract：0bjective ToestablishhepatitisBvirus(HBV)Xgeneeukaryoticexpressionvectorandidentifyits expression．Methods Polymerasechainreaction(PCR)wasusedtoamplifyXgenesequence，andthepcDNA6(+) vectorandX genePCRproductdoubleenzymedigestiontransformedintoEscherichiacoliDH5alpha．Thepositiveclones werescreened，andthedoubleenzymedigestionandDNA sequencingwereused toestablishHBV X geneeukaryotic expressionvectorpcDNA6 (+)一HBx．Bypolyetherimide (PEI)method，thetransformationintoHepG2ceilswas performed，and Westernblotidentification oftargetproteinwascarried out．Results AfterpcDNA6一HBx enzyme digestion，agarosegelelectrophoresisfoundHBxgenefragment，andsequencingresultsshowedcontainingthecomplete Xgenefragment．Western blotresultsshowedthatthepcDNA6 (+)一HBxinHepG2cellsexpressedX protein． Conclusions TheeukaryotieexpressionvectorpcDNA6(+)一HBxisestablishedsuccessfully，andthereisXprotein expression inHepG2cells． ItprovidesconvenienceforthefurtherstudyofHBV X genewith chronichepatitisand hepatocellularcarcinoma． Keywords：HepatitisB virus；X gene；Eukaryotic expression 乙型肝炎是一种高发传染病 ，乙型肝炎