貉GAPDH基因的克隆与序列分析.pdfVIP

第 l6卷第 1期 经 济 动 物 学 报 Vo1．16No．1 2012年 3月 JournalofEconomicAnimal Mar．2012 貉 GAPDH基因的克隆与序列分析 侯志军，张长生，金 辛 (东北林业大学野生动物资源学院，哈尔滨 150040) 摘 要 ：根据哺乳动物的甘油醛一3磷酸脱氢酶 (glyceraldehyde一3一phosphatedehydrogenase，GAPDH)氨基酸的保 守序列，参考犬的GAPDH基因序列，设计一对特异性引物，采用RT—PCR技术，从貉的肝脏 中扩增出一段长 271bp的序列。对其序列分析表明：该基因序列与GenBank中已发表的犬的GAPDH基因(GenBank序列号： AB028142，AB038240)同源性为 100％。本试验成功地克隆了一段貉GAPDH基因，证实了貉亦存在 GAPDH基 因且高度保守。 关键词 ：貉；GAPDH甘油醛一3一磷酸脱氢酶；克隆 中图分类号：Q785 文献标识码：A 文章编号：1007—7448(2012)01—003503 引文格式：侯志军，张长生，金辛．貉GAPDH基因的克隆与序列分析[J]．经济动物学报，2012，16(1)：3537． Cloningand SequencingofRaccoonDogGAPDH Gene HOUZhi—iun，ZHANGChang—sheng，JINXin (Collegeof ireResources，NortheastForestryUniversity，Harbin150040，China) Abstract：TheRaccoondogGAPDH genewasamplifiedandclonedbyRT-PCRfrom itsliver．Th egene wassequencedby271bp．Comparedwith the genesofcanine(GenBnak numbers：AB028142， AB038240)，theyshared100％ homology．ThistrialprovedthattheGAPDHgeneWas existedandcon— servedinraccoondog． Keywords：raccoondog；GAPDH；clone 实时荧光定量反转录 PCR(rea1．timefluores— 定量 PCR研究中常常作为内参基因，以确定 目标 centquantitativereversetranseriptionpolymerasechain 基因的相对表达量_】0J。 reaction，RT．PCR)具有精确定量、灵敏度高等优 甘油醛．3一磷酸脱氢酶(glyceraldehyde一3一phos— 点，已成为 目前研究基因差异表达的常用方法，为 phatedehydrogenase，GAPDH)是高等植物糖酵解和 检测低丰度mRNA敏感方法之一，运用该技术可 糖异生过程中的关键酶，是维持生命活动能量形 对核酸样品进行定量和定性分析。但该方法的应 成的最基本酶之一。它氧化甘油醛．3一磷酸生成 用需要选取一定的内参基因，以去除不同标本在 1，3二磷酸甘油酸，后者是糖酵解过程中产生第 RNA的产量、质量 、反转录效率上可能存在 的差 一 个 ATP的底物。近年来随着对 GAPDH研究的 别。对内参基因和 目的基因同时进行扩增，分析 不断深入 ，已发现 GAPDH除在糖酵解过程中起重 样本基因相对于内参基因的表达率可消除不同样 要作用外，还参与胚胎的特化、细胞融合、微管结 本问的差别。GAPDH基因作为管家基因，在同一 束、磷酸转移酶激活、核