p38蛋白激酶信号通路对支气管哮喘小鼠骨髓CD34~＋祖细胞迁移的调控作用.pdfVIP

南 通 大 学 学 报 (医 学 版 ) JournalofNantongUniversity(MedicalSciences)2012：32(6 ·483· p38蛋白激酶信号通路对支气管哮喘小鼠骨髓CD34+$1~细胞迁移 的调控作用 宋立红 一，倪松石 ，贲素琴 1南通大学附属医院呼吸科，南通 226001；长江大学附属医院荆州市第一人 民医院呼吸内科) 摘【 要】 目的：探讨 p38蛋 白激酶fp38MAPK)信号通路对哮喘小鼠骨髓 CD34+~细胞迁移的调控作用。方法：将小 鼠随机分为 3组 ：模型组[卵 白蛋 白(ovalbumin，0VA】组1、吡啶咪唑类衍生物干预组(SB203580组)、对照组(NS组)，每组 20 只。前两组 以OVA致敏和激发建立哮喘模型．其 中SB203580组于抗原激发前经腹腔注射 SB203580。于最后一次抗原 激发后 48h，留取骨髓悬液、支气管肺泡灌b~ (bronchoalveolarlavagefluid，BALF)及外周血 ，分别行细胞计数、流式细胞 仪分析及细胞涂片 。留取肺组织制备组织切片 。体外趋化实验检测各骨髓 CD34~祖细胞对 eotaxin的趋化反应和 WesternBlot检测骨髓 CD3 祖细胞上磷酸 p38MAPK蛋 白的表达。结果：OVA组小鼠BALF、外周血中炎症细胞总数、嗜酸 性粒细胞(eosinophil，Eos)数及 CD34~细胞数较NS组明显增加，而骨髓中CD34~细胞数较NS组无明显变化(尸0．051，体外趋 化实验表明OVA组小 鼠骨髓 CD34~祖细胞对 eotaxin趋化反应明显增强，与NS组相比差异有统计学意义(尸如．o1)，Western Blot显示 OVA组小鼠骨髓中CD34+~细胞上磷酸化p38MAPK蛋白的表达明显高于NS组(P0．011：SB203580组上述指标 较 OVA组 明显降低 0．011，肺组织 Eos浸润及黏液高分泌亦较 OVA组明显减轻。结论 ：通过SB203580抑制 p38MAPK的 活性可以降低哮喘小鼠骨髓中CD34+~细胞的迁移．从而抑制气道嗜酸性粒细胞炎症 ．为哮喘的防治提供新视角。 关『键词1支气管哮喘；p38蛋白激酶 ；CD34~祖细胞；迁移 中『图分类号1 R562．2~5 文『献标志码1 A 文『章编号1 1674—7887(2012)06—0483—05 支气管哮喘f哮喘1是呼吸系统的常见病，以气道 抗小鼠磷酸化一p38单克隆抗体、抗小鼠CD34~-PE 内嗜酸性粒细胞 cosinophil，Eos1浸润和气道高反应 单克隆抗体(Biolegend公司1；anti—PE磁珠、Biotin— ~(airwavhyperresponsiveness，AHR)为主要特征[1-3]。 AntibodiesCocktail,anti—Bi0tin磁珠；Bi0一RAD蛋 白 气道 Eos浸润有两种来源：一是成熟的Eos在抗原 定量分析药盒；MS分选柱、MiniMACS分选器 、超声 激发后从骨髓向气道迁移 ；二是哮喘状态下骨髓中 雾化器(MittenyiBiotec公司)。 的CD34姐 细胞向气道迁移及局部的进一步分化4]【。 1．2 实验分组 将 68周龄的清洁级雌性小鼠随 控制这两条途径所致的Eos增多才能从源头上控制 机分为模型组(OVA组1、SB203580干预组(SB203580 哮喘的气道Eos炎症。目前关于Eos从骨髓向气道 组1和对照组(NS组1，每组 2O只。采用OVA致敏和 迁移的机制研究较多，而对 CD34+祖细胞从骨髓向 激发建立哮喘模型[2]：第 0天与第 14天经腹腔注射 气道迁移的调控作用研究较少。本文中应用特异性 致敏液f每只小鼠腹腔注射的量 ：OVA50Izg+Al(OH)， p38MAPK抑制剂 SB203580干预哮喘小 鼠，探讨 2mg溶于0．2mL生理盐水后行腹腔注射)。对照组 D38MAPK对哮喘小鼠骨髓