抗人PD-1高亲和力抗血清的制备及其在PD-1免疫印迹分析中的应用.pdfVIP

维普资讯 第29卷 第3期 暨南大学学报 (自然科学版) VO1．29 No．3 2008年 6月 JournalofJinanUniversity(NaturalScience) Jun． 2oo8 抗人PD．1高亲和力抗血清的制备及其 在 PD．1免疫印迹分析 中的应用 施焕敬 ，徐丽慧2， 韩 捷 ， 卢宏松 ， 何贤辉 (暨南大学生命科学技术学院 1．组织移植与免疫实验中心；2．生物工程研究所 ，广东 广州510632) [摘 要] 利用纯化的可溶性人PD．1胞外域(sPD-1)蛋白为免疫原免疫小鼠，获得抗血清．免疫印迹显示该抗血 清与原核表达的sPD一1有特异性反应，但与某些菌体蛋白存在交叉反应．经菌体蛋白吸附法处理后 ，交叉反应明显 减弱．以商业化抗人 PD-1抗体和小鼠sPD．1抗血清分析经亲和层析富集的活化的JurkatT细胞表达的PD一1，只有 自制的抗血清鉴定到特异反应条带，其表观分子质量为49ku． [关键词] 程序死亡蛋白-1；JurkatT细胞；抗血清；免疫印迹 [中图分类号] R392．12 [文献标识码] A [文章编号] 1000—9965(2008)03—0315一O5 Preparation ofanti-humanPD-1antiserum withhigh-affinityandits applicationinPD-1immunoblottinganalysis SHIHuan-jing， XULi．hui， HANJie， LUHong—song， HEXian—hui (1．InstituteofTissueTransplantationandImmunology；2．InstituteofBioengineering，CollegeofLifeScienceand Technology，JinnaUniversity，Guangzhou510632，China) [Abstract] eanti—humanoslubleprogramdeath一1(sPD-1)antiserumwaspreparedbyimmunizing micewiht htepurifiedrecombinnatsPD一1．Immunoblottinganalysisshowedhtatthisantiseurm hadspe— cificreactionwiht sPD—1．nadhadsomecross—reactivitywiht bacterialproteins．rhisCROSS—reactivitywas significnatlydecreasedaftertreatinghteantiseurmwithwholebacteriallysates．PD一1expressedbyactiva- tedJurkatTcellswasenrichedbyaffinitychromatorgaphy，nadassayedbycommercialantibodyandhte antiesurm respectively．Onlyhteantiseurm identifiedhtenaturalPD一1，itsapparentmolecularweightis about49Oo0． [Keywords] prorgmameddeaht一1；JurkatTcell；antiseurm； immunoblotting 程序死亡蛋白一1(prorgammeddeaht1，PD一1)是 ceptortyrosine—basedinhibitorymotif，ITIM)和免疫受 早年发现的一个与细胞凋亡相关的 I型跨膜蛋 白， 体酪氨酸转换基序 (immunorece