猫泛白细胞减少症病毒的分离与鉴定.pdfVIP

维普资讯 中国兽医杂志 2008年 (第 44卷)第 6期 43 猫 泛 白细胞 减 少 症 病 毒 的分 离 与鉴 定 周珍辉 ，陈万荣。，付少才。，周育森。，向双云 ，曹授俊 (1．北京农业职业学院畜牧兽医系，北京 房山 102442；2．军事医学科学院微生物流行病研究所 ，北京 丰 台 100071； 3．北京京霸生物技术开发研 究公司 ，北京 丰 台 100071) 中图分类号：$858．293 文献标识码 ：B 文章编号：0529—6005(2008)06—0043—01 猫瘟 热 病毒又 称猫泛 白细胞 减少症 病毒 悬液中，5mL细胞悬液 中加入 2mL样品，置 37℃、 (FPV)，是引起猫及猫科动物 的一种急性高度接触 5％CO 温箱 中培养 ，24h后换成维持液，继续培 性传染病。我们在 2005年 l2月收集到 l例疑似猫 养 ，逐 日观察细胞病变 (CPE)。 泛 白细胞减少症 的急性期粪便 ，用 FPV抗原金标记 1．3 血凝试验 将分离的病毒在 96孔 V 型微量 试纸 条检测 为强 阳性 ，该粪便 经处理后接种 到 血凝板上用生理盐水倍 比稀释后 ，再分别加入等体 FK81单层细胞上成功地分离到一株病毒 ，经鉴定 积的 l％猪红细胞悬液 ，轻微振荡均匀 ，置 4℃ 2～ 为 FPV，命名为 BJ—JB一8。报告如下 。 4h后判断结果。 1 材料与方法 1．4 病毒交叉血凝抑制试验 本试验在 V型血凝 1．1 材料 传代细胞有猫 肾细胞 (FK81)、水貂肺 板上进行 。4单位 FPV病毒与抗 FPV 标准血清、 细胞 (CCL64)和非洲绿猴肾细胞 (Vero)；抗 FPV标 抗 cPV免疫血清 ；4单位 CPV病毒与抗 FPV标准 准血清、抗 CPV免疫血清及 CPV标准毒株均 由北 血清、抗 CPV免疫血清作血凝抑制试验。其具体操 京京霸生物技术开发研 究公司提供 。免疫荧光抗 作按常规方法进行 ，在对照成立 的情况下 ，以使 4单 体、金标记 FPV试纸条购 自韩国(AnigenGenetics， 位病毒凝集红细胞 的作用被完全抑制的最高血清稀 Inc．476—1Pajang—dong，Jangan-gu，Suwon，Kyong— 释度作为 HI的结果判定 。 gi—do，Korea)。一次性培养瓶 、DMEM 和小牛血清 1．5 免疫 电镜 将传至 5代的病毒反复冻融 3次， 购 白北京博菲康生物技术有限公司。 以5000r／rain离心 5rain，取上清液 lmL与 l：20 1．2 病毒分离 收集 的猫粪便用 DMEM 作 l：5 稀释的抗 FPV标准血清等量混合 ，37℃lh，置 4℃ 稀释 ，离心取上清液 ，再经 0．2 L滤膜过滤 除菌 ， 过夜 ，次 日以12000r／min离 心5rain，弃上清 ，沉 一 80℃保存备用 。取 除菌的样品接种于 FK8l细胞 淀物用磷钨酸负染后 ，电镜观察 。 1．6 免疫荧光抗体试验 将分离病毒按常规制成 收稿 日期 ：2006—10—27 抗原片 ，用 引进 的FPV荧光抗体染色 ，在荧光显微 道 ，高原低氧环境对心脏 的电生理活动产生一定影 发生率高是世居青海高原 的动物正常心电图的又一 响 ，尤其对右心的影响特别突出。据此 ，笔者认为平 特征 ，青海藏山羊也同样具有这一特征 。