小鼠骨髓瘤细胞染色体标本的制备.pdfVIP

小鼠骨髓瘤细胞染色体标本的制备 小鼠骨髓瘤细胞染色体标本的制备 实验目的： 实验目的： 掌握小鼠骨髓细胞染色体的原理和制备方法，识别小鼠染 掌握小鼠骨髓细胞染色体的原理和制备方法，识别小鼠染 色体的数目及特点。 色体的数目及特点。 实验原理： 实验原理： 骨髓细胞具有高度的分裂活性，经秋水仙素或秋水酰胺处 骨髓细胞具有高度的分裂活性，经秋水仙素或秋水酰胺处 理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗处理、 理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗处理、 固定、滴片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞的染色 固定、滴片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞的染色 体标本。 体标本。 实验用品： 实验用品： 1．器材：解剖器具、注射器、离心机、离心管、恒 1．器材：解剖器具、注射器、离心机、离心管、恒 温水浴箱、载玻片、酒精灯等； 温水浴箱、载玻片、酒精灯等； 2．试剂 0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液 2．试剂 0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液 （甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI溶 （甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI溶 液、Giemsa染液等。 液、Giemsa染液等。 3．材料：小鼠 3．材料：小鼠 方法与步骤： 方法与步骤： 1.取材前3～4 h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动 1.取材前3～4 h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动 物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断 物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断 在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。 在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。 2.腹腔内注射秋水仙素3～4小时后，断头处死小鼠。 2.腹腔内注射秋水仙素3～4小时后，断头处死小鼠。 3.取出小鼠的后肢骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造 3.取出小鼠的后肢骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造 成骨髓细胞的流失。 成骨髓细胞的流失。 4.滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将皮肤、肌肉等 4.滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将皮肤、肌肉等 组织清除干净。 组织清除干净。 5.加入适量低渗液，用剪刀将骨充分剪碎，并用吸管吹 5.加入适量低渗液，用剪刀将骨充分剪碎，并用吸管吹 打，使骨髓细胞全部释放出来。 打，使骨髓细胞全部释放出来。 6.用滤网将获得的液体过滤到离心管中，加低渗液至8ml 6.用滤网将获得的液体过滤到离心管中，加低渗液至8ml 左右，室温下静置20～30分钟，进行低渗。低渗结束后， 左右，室温下静置20～30分钟，进行低渗。低渗结束后， 加入1ml左右的Carnoy’s 固定液进行预固定，轻轻混匀 加入1ml左右的Carnoy’s 固定液进行预固定，轻轻混匀 后，离心。 后，离心。 7. 1200转/分，离心5分钟，弃上清，加入固定液，混匀 7. 1200转/分，离心5分钟，弃上清，加入固定液，混匀 后，室温放置30分钟，再次离心去上清，重复固定一次， 后，室温放置30分钟，再次离心去上清，重复固定一次， 离心后，向沉淀中加入1ml预冷的固定液，将细胞重悬。 离心后，向沉淀中加入1ml预冷的固定液，将细胞重悬。 8.取洁净冰水中预冷的载玻片，稍作倾斜，用吸管吸取一 8.取洁净冰水中预冷的载玻片，稍作倾斜，用吸管吸取一 滴上述细胞悬浮液，于载玻片上方适当高度滴在载玻片 滴上述细胞悬浮液，于载玻片上方适当高度滴在载玻片 上； 上； 9.滴片后，将片子晾干，滴加适量Giemsa染液染色10～ 9.滴片后，将片子晾干，滴加适量Giemsa染液染色10～ 15分钟，弃去染液，水洗，镜检。 15分钟，弃去染液，水洗，镜检。 结果： 结果： 作业: 作业: 绘图表示动物染色体的典型形态。 绘图表示动物染色体的典型形态。 说明在小鼠骨髓染色体的制备过程中的关键步 说明在小鼠骨髓染色体的制备过程中的关键步 骤。 骤。