新型超支状液晶核酸传感器用于p53突变基因的检测.pdfVIP

V01．34 高等学校化学学报 No．4 CHEMICALOF 2013年4月 JOURNALCHINESEUNIVERSITIES 806～812 新型超支状液晶核酸传感器用于p53 突变基因的检测 范玉霞，谭 慧，留玲微，吴朝阳，沈国励，俞汝勤 (湖南大学化学生物传感与计量学国家重点实验室，长沙410082) 摘要基于核酸杂交链式反应影响液晶取向的原理，构建了一种新型的超支状液晶核酸传感器用于检测p53 突变基因．本文突破传统构建超支状分子的方式，采用杂交链式反应方法，以目标序列p53突变基因作为引 发剂，3种不同的发卡探针Hairpin C为单体，在温和的条件下，通过改变单体的浓度 A，HairpinB和Hairpin 和反应时间自发杂交组装形成尺寸和分子量可控的超支状DNA(branched．1ikeDNA，bDNA)．借助捕获探针 将该超支状DNA连接到液晶传感基底表面，观察液晶分子取向改变前后的光学信号，实现了p53基因含 249密码子突变序列的快速检测．本方法有望为核酸诊断的发展提供一种新的方法和思路． 关键词杂交链式反应；取向改变；超支状DNA；液晶生物传感器 中图分类号0657．39 文献标志码A 液晶生物传感器是基于液晶分子能在特殊敏感膜表面呈有序的空间取向，敏感膜与特定的生物分 子发生键合作用后，液晶分子取向发生变化，导致传感器偏光显微图象的颜色和光亮度发生变化，从 而实现对生物分子的检测．液晶传感器具有操作简单、响应快速、灵敏度高及成本低等特点，使其从 众多的传感器中脱颖而出，应用领域从最初的检测有机气体和小分子拓展到生物大分子口q]．目前， 液晶生物传感器研究主要是将蛋白质和核酸等生物分子直接结合到传感器界面，扰乱液晶分子的有序 排列，实现对生物分子的检测M柚J．该方法简单，但检测灵敏度较低，难以满足现代生物分析检测的 要求．基于液晶生物传感器的研究现状，本课题组u0’111提出了多种信号增强方法如酶催化银沉积和调 制生成纳米金法，分别实现了对核酸、乙酰胆碱及其抑制剂的高灵敏检测，这些信号增强技术为进一 步扩大液晶传感技术的应用范围提供了新的途径． 随着纳米技术与生物技术的快速发展，DNA分子作为遗传信息携带者，因其优良的杂交反应特 性，在构建超分子方面成为非常有前景的纳米材料之一．近年来，科研工作者构建了稳定性好、构型 多样的DNA纳米材料，如四臂交叉结构的二维有序阵列、八面体结构的三维纳米材料及DNA纳米管 等unl9 J，在诸多领域特别是生物医学中得到了广泛应用． 本文基于核酸杂交链式反应原理，提出了一种新的超支状核酸信号放大方法，用于检测肝细胞肝 癌主要致病的p53基因含249密码子突变Ⅲ’2¨的DNA序列．选择3种结构稳定性高、特异性强的发卡 探针为单体嵋2|，靶分子p53基因突变的DNA序列为引发剂，在温和的实验条件下，以杂交链式反应 方式自发地形成树支状DNA超分子．所形成的DNA超分子末端含有大量未杂交的活性单链DNA碱 基序列，可高效地被液晶传感基底表面捕获，利用液晶分子对基底表面DNA超分子大尺寸的灵敏反 应，可以检测到增强的偏光响应信号．该方法在形成超支状DNA结构过程中无需T4DNA连接酶，参 与反应的DNA链种类少，减少了形成次级结构的可能，且形成的超支状DNA结构稳定性高．相比其 它方法，这种新型的液晶生物传感器操作简单、选择性好、无需标记且成本低，在其它以核酸杂交反 收稿日期：2012—12—12． 资助． 联系人简介：吴朝阳，男，博士，教授，博士生导师，主要从事电化学与生物传感研究．E-mail：zywu@hnu．edu．en 万方数据 No．4 范玉霞等：新型超支状液晶核酸传感器用于p53突变基因的检测 应为基础的基因检测中将发挥巨大潜能． 1 实验部分 1．1仪器与试剂 Nikon 50i EclipsePOL偏光显微镜(日本尼康公司)