海洋细菌QDC01鉴定及其几丁质酶基因克隆与分析.pdfVIP

Online system: http://www.j 农 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2013, 21(6): 734~744 DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2013.06.013 研究报告 Letter 海洋细菌QDC01 的鉴定及其几丁质酶 因的克隆与分析 1 1，2 2 2 2 2* 王振东 罗春艳 杨晨 张殿朋 吴慧玲 刘伟成 1 沈阳农业大学生物科学技术学院，沈阳110 161；2 北京市农林科学院植物保护环境保护研究所，北京100097 * 通讯作者，liuwich@163.com 要 海洋微生物是几丁质酶的重要来源。 研究从青岛海域海蜇(Rhopilema esculenta)体中分离到 一株产几丁质酶的细菌QDC01，通过形态、培养特征以及16S rDNA 序列同源性分析，将该菌株鉴定为嗜 水气单胞菌(Aeromonas hydrop hila) 。根据已报道的嗜水气单胞菌几丁质酶基因相关序列设计引物，克隆 了QDC01 几丁质酶基因，命名为ahchi(GenBank : JX863407) 。应用生物信息学软件对获得的基因序列及 编码的蛋白序列进行分析，结果显示，ahchi 开放阅读框(ORF)长2 100 bp ，无内含子，其编码的蛋白由699 个氨 酸组成，分子量为74.875 kD ，等电点为5.81 。序列比对和同源性分析结果表明，该 因与嗜水气 T 单胞菌(Aeromonas hydrop hila subsp. hydrop hila)ATCC 7966 几丁质酶基因(GenBank 登录号: CP000462) 的 相似性最高，为98% ；相应的氨 酸序列同源性为98% 。系统进化分析以及Ahchi 的保守结构域分析表 明，Ahchi 属于 型几丁质酶，糖苷水解酶19家族。采用限制性内切酶(BamH 和Hind Ⅲ)双酶切法构建 了原核表达载体pET-30a(+)-ahchi ，并经IPTG 诱导在大肠杆菌(Escherichia coli) 中成功表达。在 础产酶 发酵条件下，菌株QDC01 所产粗酶液酶活力达0.2 1 U/mL ，采用文献报道的优化产酶发酵条件，菌株 QDC01 所产粗酶液酶活力可达0.58 U/mL ，是前人报道的产几丁质酶嗜水气单胞菌SWCH-6 所产酶活力 的1.49 倍，同时也高于已报道的气单胞菌(Aeromonas sp .)CJ-5 的酶活力(0.4 1 U/mL)，为微生物源几丁质酶 开发应用提供了又一优良种质资源。 关键词 嗜水气单胞菌，分类鉴定，几丁质酶 因，克隆与分析 Identification of Chitinase- producing Marine Bacterium QDC0 1 and Cloning and Analysis of the Chitinase Gene WANG Zhen-Dong1 LUO Chun-Yan1,2 YANG Chen2 ZHANG Dian-Peng2 WU Hui-Ling2 LIU Wei- Cheng2* 1 College of Biological Sciences and Technology,Shenyang Agricultural University, Shenyang 110 16 1, China; 2 Institute of Plant and Environment Protection, Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences, Beijing 100097, China * Corresponding author, liuwich@ 1