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第1讲 微生物的利用和生物技术在食品加工中的应用
考纲要求 1.微生物的实验室培养。2.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数。3.果酒及果醋的制作。4.胡萝卜素的提取。
构建网络 内化体系
填充关键点 思考连接处 (1)制备固体培养基最后要将平板倒置,主要目的是什么?
提示 防止培养皿盖上的水珠滴入培养基造成污染。
(2)平板划线法中的“连续划线”和稀释涂布平板法中的“系列稀释”目的一样吗?
提示 一样,都是为了保证菌种单个分布。
(3)果酒和果醋制作中所用的发酵菌种在结构上的本质区别是什么?
提示 前者是真核生物,后者是原核生物,其本质区别是酵母菌有核膜包被的细胞核。
考点1 微生物的利用
1. 微生物培养的基本技术
(1)制备培养基:计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。
(2)无菌技术:主要指消毒和灭菌。
(3)倒平板操作:待培养基冷却至50_℃左右时,在酒精灯火焰旁倒平板。
(4)平板划线操作:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
(5)稀释涂布平板法:先将菌液进行一系列梯度稀释后涂布平板,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散到培养基的表面,从而在培养基表面形成单个菌落。如图:
2. 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
(1)分离原理:土壤中细菌之所以能分解尿素,是由于它们体内能合成脲酶,这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。
(2)统计菌落数目:统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。
(3)实验流程:土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。
【思维辨析】
(1)微生物的培养基分装到培养皿后进行灭菌(2013·江苏,18A改编)( × )
提示 先灭菌,后倒平板。
(2)微生物接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养(2013·江苏,18C改编)( × )
提示 接种后放置在恒温培养箱中进行培养。
(3)微生物培养过程中每隔一周观察一次(2013·江苏,18D改编)( × )
提示 培养过程中一般要隔天观察一次。
(4)常用液体培养基分离获得细菌单菌落(2012·大纲全国,5B)( × )
提示 常用固体培养基分离。
【归纳提炼】
1. 消毒与灭菌的区别
项目 消毒 灭菌条件 使用较为温和的理化方法 使用强烈的理化方法 结果 杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子) 杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子 适用 实验操作的空间、操作者的衣着和手 微生物的培养器皿、接种用具和培养基等 常用方法 煮沸消毒法(如在100 ℃煮沸5~6 min)、巴氏消毒法(如在80 ℃煮15 min);使用酒精、氯气等化学药剂进行消毒 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 2选择培养基中的选择因素
(1)培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。
(2)培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。
(3)培养基中缺乏氮源时,可以分离固氮微生物,因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。
(4)当培养基的某种营养成分为特定化学成分时,也具有分离效果。如石油是唯一碳源时,可以抑制不能利用石油的微生物的生长,使能够利用石油的微生物生存,达到分离能消除石油污染的微生物的目的。
(5)改变微生物的培养条件,也可以达到分离微生物的目的,如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。
3. 计数方法
(1)显微镜直接计数法:利用特定细菌计数板或血球计数板,在显微镜下计数一定容积样品中的细菌数量。该方法不能区分细菌的死活。
(2)间接计数法(活菌计数法):常用稀释涂布平板法。
稀释涂布平板法的理论依据是:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落即代表一个活菌。为了保证结果准确,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数,每个稀释倍数涂布3个平板进行计数,取平均值。
例1 (2013·新课标全国卷Ⅱ,39)临床使用抗生素前,有时需要做细菌耐药实验。实验时,首先要从病人身上获取少量样本,然后按照一定的实验步骤操作,以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。
回答下列问题:
(1)为了从样本中获取致病菌单菌落,可用____________法或____________法将样本接种于固体培养基表面,经过选择培养、鉴别等步骤获得。
(2)取该单菌落适当稀释,用__________法接种于固体培养基表面,在37 ℃培养箱中培养24 h,使其均匀生长,布满平板。
(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性,将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置,培养一段时间后,含A的滤纸片周围出现透明圈,说明该致病菌对抗生素A____________;含B的滤纸片周围没有出现透明圈,说明该致病菌对抗生素B____________;含C的滤纸片周围
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