草坪草腐霉枯萎病菌的分离鉴定及其对高羊茅的致病性.pdfVIP

第 34卷 第 6期 中 国 草 地 学 报 2012年 “月 V01．34 NO．6 ChineseJournalofGrassland NOV．2O12 文章编 号 ：1673-5021(2012)06—0061-08 草坪草腐霉枯萎病菌的分离鉴定及其对高羊茅的致病性 李银萍，袁庆华 ，王 瑜 (中国农业科学 院北京畜牧兽 医研究所 ，北京 100193) 摘要：对采 自高尔夫球场 内11份早熟禾的腐霉病株进行分离培养 ，形态学鉴定为瓜果腐霉。生物学测定结果 表明，其最适生长温度是 35℃，在 25～35℃时生长速度最快 ；最适 pH值为 7．5，在 pH值为 6～9时生长较好 ；通过 rDNA—ITS序列测定和同源性 比较也表明，菌株是瓜果腐霉，用 MEGA5．0软件构建系统发育树得到，与该菌株遗 传距离最近的腐霉是 AF452151；对高羊茅品种美洲虎 4号 (Jaguar4G)的致病性试验测定表 明，该菌株为致病菌。 关键词 ：瓜果腐霉 ；生物学测定 ；rDNA—ITS 中图分类号 ：$435．4 文献标识码 ：A 草坪草腐霉枯萎病 (Pythium diseases)是一种 份病样。将病样放入 4℃冰箱保存 ，待分离 。美洲 发病迅速、破坏力极强的病害 ]，也是冷季型草坪的 虎 4号(Jaguar4G)高羊茅种子 由北京 中畜阳光牧 一 种毁灭性病害 ，几乎所有草坪均能感染此病 l2]。 业科技发展有限公司提供。 其适应性较强 ，既能在冷湿环境中侵染危害 ，也能在 1．2 病原菌的分离和保存 天气炎热潮湿 时猖獗流行 ]，常常造成草坪草的苗 病原菌的分离采用组织块分离法口 。将采集 腐、成株根腐、叶腐 ，因腐霉猝倒和叶腐病造成草坪 到的地下根茎部病原组织用 自来水反复冲洗多次 ， 枯死面积一般在 3O9／6～50 ，严重时可达 8O [4]。 剪成 0．5cm小段，然后用 75 酒精浸泡 lmin，再用 许多研究表明，引起草坪草腐霉枯萎病的病原菌主 0．1 的升汞消毒 30s，无菌水冲洗 3次，灭菌滤纸 要有 6个种[5]，即瓜 果腐霉 (P．aphaniderma- 吸干表面水分后接种到 PDA培养基上 ，28℃黑暗 turn)、终极 腐 霉 (P．graminnicola)、群 结腐 霉 条件下培养 3d，然后挑取菌丝置于已加入 40#g／mL (P．myriotylum)、禾谷腐霉 (P．graminicola)、范 链霉素的CMA培养基 中培养 ，重复纯化 3次。本 特腐霉 (P．vanterpoolii)和 德里腐 霉 (P．den— 试验共分离到 】1个菌株，分别将 1】个纯化 的菌株 liense)。其中，哪些种是主要 的致病 菌不同研 究者 挑取边缘菌丝接入 CMA培养基试管斜面保存 ，每6 有不同的结论 ，徐娇等[研究认为 ，草坪草腐霉枯萎 个月转管一次 。 病的致病菌主要是瓜果腐霉菌；王 国良等 研究表 1．3 病原菌的形态学鉴定 明，不仅瓜果腐霉是主要致病菌，德里腐霉也是重要 1．3．1 有性态的诱导和观察 的致病菌；张沽等_j阳认为，禾谷腐霉也是重要 的致 将供试菌分别接种于直径 9cm 的 CMA、PDA 病菌；张玉琴 等认为 ，致病菌不同所引起 的草坪草 平板上，30℃黑暗条件下培养 35d，挑取菌丝制片观 腐霉枯萎病病状和病症不 同，并造成草坪草各器官 察藏卵器的形状、着生方式 、壁是否光滑，卵孢子 的 不同程度受害 ，因此采取 的防治措施也应不尽相 大小、是否满器 、壁的厚度 ，雄器的形状 、大小、数 目、 同ll。为了明确草坪腐霉枯萎病主要致病菌种类 ， 位置和来源 。 本试验采用形态学和分子生物学方法对草坪草腐霉 1．3．2 无性 态的诱导和观察 枯萎病病原