大规模噬菌体DNA测序样品制备方法的改进与应用.pdfVIP

…尔医药2_()o8年第48卷第46期 大规模噬菌体 DNA测序样品制备方法的 改进与应用 刘承武，姚 琦，袁利华，牛茂昌，刘靖华，杨 敏，冯国开，姜 勇 (南方医科大学，广东广州510515) [摘要] 目的 优化大规模噬菌体DNA测序样品制备的方法，提高筛选效率。方法 通过PcR扩增噬菌体 环七肽库第一轮、第二轮和第三轮淘选产物中含插入 目的片段噬菌体 DNA，经琼脂糖凝胶电泳和DNA测序鉴定， 并与经典的噬菌体DNA提取方法进行比较。结果 PcR扩增法和经典法制备的噬菌体DNA的测序成功率分别 为92．73％、93．75％，差异无统计学意义(P0．05)；两种方法制备的同一个噬菌体克隆的DNA经测序鉴定显示测 序结果一致；第一轮、第二轮和第三轮淘选产物的噬菌体克隆经PcR扩增和电泳鉴定 ，发现无插入 目的片段的噬菌 体克隆检出率逐轮增加分别为 1．04％、4．17％和 22．69％(P0．叭)。结论 PcR扩增含插入 目的片段噬菌体 DNA的方法可使大规模噬菌体筛选和DNA测序更加方便、快捷、实用，值得推广。 [关键词] 噬菌体展示技术；DNA噬菌体；聚