黄背木耳多糖对巨噬细胞的激活作用.pdfVIP

维普资讯 中国食用菌 2008，27 (3)：41-42，49 CN53—1054／Q ISSN 1003-8310 EDIBLE FUNGIOFCHINA 黄背木耳多糖对 巨噬细胞的激活作用 许晓燕 ，余梦瑶 ，一，罗 霞 ，清 源 ，江 南 ，曾瑾 ，．，郑林用 ’ (1．四川省中医药科学院中药细胞与分子生物学实验室 ，成都 610041；2．四川大学生命科学院，成都 610064； 3．四川省农科 院，成都 610066；4．成都 中医药大学，成都 6l1137) 摘要：通过 中性红吞噬法、GrieSS法、ELISA法检测黄背木耳 多糖增强巨噬细胞的吞噬作用，提高生成 NO的能力，促 进细胞因子的分泌。黄背木耳多糖能够有效地激活巨噬细胞，可能是其抗肿瘤作用的主要机制。 关键词 ：黄背木耳多糖 ；巨噬细胞 ；吞噬作用；NO；细胞 因子 中图分类号 ：$646．6 文献标识码 ：A 文章编号 ：1003—8310 (2008)03—0041—03 本文对从黄背木耳子实体 中提取的多糖 的巨噬细胞激 96孔细胞培养板 中．分别加入各浓度 的APPIIA和 10tzg· 活作用进行了研究．以期对其抗肿瘤作用机制进行部分阐 mL 的LPS，补充培养液至 200tzL。培养 24h后 ，弃去培 明。 养液并 以PBS洗涤 2次 ，加入 lmg·mL 的中性红生理盐 1 材料与方法 水溶液 ，继续培养 30min。倾 去上清液 ，用 PBS洗 3遍 ， 1．1材料 每孔加入细胞裂解液 (乙醇：冰醋酸：1：1)100tzL，室温下 1．1．1 细胞 放置 2h～3h．待细胞溶解后 ．在酶标仪上测定 540nm 出吸 小 鼠巨噬细胞株 RAW264．7购 自ATCC (编 号 ATCC 光度 。 TIB一71)，培养于含 10％胎牛血清 的DMEM培养液 中 (含 1．2．2 N0的测定 100tzg·mL。青霉素 ，100tzg·mL 链霉 素 )，置于 37~C， NO不稳定 ．采用 Griess法旧对 NO-2定量 间接反应 NO 5％CO 细胞培养箱中，每隔2天传代 1次。 生成 。为排除酚红对本实验的影响 ，本实验 中以无酚红 1．1．2 试剂 DMEM 培 养 液 进 行 实 验 。 1×10 个 对 数 生 长 期 的 DMEM培养基和无酚红 DMEM培养基 (Gibco公司)， RAW264．7细胞接种于 24孔细胞培养板 中，并加入各浓度 胎牛血清 (Hyclone公 司 )，脂 多糖 (LPS)(Sigma公司 ， 的APPIIA和 10tzgm·L 的LPS．补充培养液至 lmL。置于 055：B5)，ELISA试剂盒 (RD公司)。其他试剂均为 国产 培养箱中培养 48h后，以NaNO 作标准 曲线，对 清液中 分析纯 。 NO含量进行测定 。100 L上清液 中加入等体积 的 Griess 1．1-3 黄背木耳多糖 试剂 (1％磺胺 ，0．1％盐酸萘 乙二胺 ，2．5％磷酸 )，室温下 黄背木耳多糖 由本实验室提取 。来源为产 自四川省 中 反应 10rain，酶标仪上测定 540nm处吸光度 。 江县菌株 781干燥子实体。经水提醇沉、Sevag法1I除