华南虎绦虫ITS及5.8S rDNA序列扩增与序列分析.pdfVIP

河南农业科学 ，2011，40(8)：205—209 JournalofHenanAgriculturalSciences 华南虎绦虫 ITS及 5．8SrDNA序列 扩增与序 列分析 张新高 ，侯 杰。，陈 武。，程 田 ，林瑞庆 (1．深圳市南 山区动物防疫监督所 ，广东 深圳 518051；2．华南农业大学 兽医学院，广东 广州 510642； 3．广州动物园 ，广东 广州 510070) 摘要：以从广州动物园华南虎体 内采集的2条绦 虫作为研 究对 象，利用核糖体 DNA(rDNA)内转 录间隔区序列 (ITS)的遗传标记特点，用保 守引物 BD1和 BD2对提 取的 DNA进行 PCR扩增，经 胶 回收纯化后 ，连接到 pGEM ～TEasy栽体上 ，然后转化并鉴定 出阳性菌落，对菌落进行 PCR扩 增并测序 ，将测序结果与 GenBank公布的相关绦虫 ITS序 列进行对比分析 ，结果显示，采 自广州动 物 园华南虎的 2条绦 虫 ITS及 5．8SrDNA序列总长均为 1387bp，序列相似性为 100 ，与猬迭宫 绦虫 (Spirometrae n。fP妇Mr0ne)、舌形属 绦 虫 (Diphyllobothrium ligula)、宽节双 叶槽 绦 虫 (Diphyllobothrium latum)的 ITS及 5．8SrDNA序列相似性分别为 96．7％、66．59／6、71．5％，结果 显示 ，此次分 离的绦 虫属 于迭宫属 的猬迭宫绦 虫，所测得 的华 南虎猬迭宫绦 虫的 ITS序列为首次 报道 。 关键词：华南虎；绦 虫；核糖体 DNA；内转录间隔区序列；鉴定 中图分类号 ：$855．9 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—3268(2011)08—0205—05 AmplificationandSequenceAnalysisoftheITSand 5．8SrDNA ofCestodesFrom PantheratigrisamoyensisinChina ZHANG Xin—gao ，HOU Jie，CHEN Wu。，CHENG Tian ，LIN Rui—qing。 (1．NanshanDistrictInstituteofAnimalDiseasesPreventionandControl，Shenzhen518051，China； 2．CollegeofVeterinaryM edicine，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China； 3．GuangzhouZoo，Guangzhou510070，China) Abstract：Utilizingthefirstandsecond nternaItranscribed spacersofribosomaIDNA (ITSrD— NA)asthegeneticmarker，thespecificidentityoftheeestodesfrom aSouthChinatiger(Pn — theratigrisamoyensis)inGuangzhou Zoowasperformed in thepresentstudy．TheITSrDNA wasamplifiedbyPCR usingtheconservedprimerpairBD1andBD2．ThePCR productswerepu— rifled，clonedinto PGEM—T Easyvector，and thenthepositivecloneswereselectedforsequen— cing．DNA sequenceswerecompared with relevantsequencespreviously reported in GenBank． TheresultsshowedthattheITSand5．8SrDNA ofthecestodesfrom Pa