巴戟天ISSR体系的建立与优化.pdfVIP

研究报告 刘颖嘉 等：巴戟天 ISSR体系的建立与优化 · 研究报告 · 巴戟天 ISSR体系的建立与优化 刘颖嘉， 黄 宇， 荣俊冬， 何天友， 胡迪科， 郑郁善 (福建农林大学工业原料林研究所， 福州 350002) 摘要：以巴戟天叶片提取的基 因组 DNA为材料，对影响 ISSR．PCR扩增效果的一些 因素，如 dNTPs浓度、Mg“浓度、 TaqDNA聚合酶用量、引物用量、模板DNA用量以及退火温度等指标进行筛选和优化，确立了可用于巴戟天的ISSR—PCR 分析最适宜的PCR反应条件，即2Ox／lPCR反应体积中含O．2mmo~LdNTPs，2．0mmo~LMg“，1．OUTaqDNA聚合酶， 0．5gmo~L引物，50ng模板DNA。PCR扩增程序 ：94oC预变性 5min，94℃变性30S，53．4℃退火45S，72oC延伸 1min， 45个循环 ，72℃延伸 10min，4℃保存 。应用该 ISSR体 系对 6份 巴戟天种质进行 了扩增 ，证实了该体系的适用性和稳