山羊痘病毒SYBRGreen I荧光PCR检测方法的建立.pdfVIP

山地 农 业 生物 学报 27(6)：503～507，2008 Journal of Mountain Agriculture and Biology 山羊痘病毒 SYBRGreenI 荧光 PCR检测方法的建立木 罗阿东 ，唐 源 ，文 明 ’，岳 筠 ，程振涛 ，徐春志 (1．贵州大学 动物科学学院，贵州 贵阳 550025；2．贵州大学动物疫病研究所，贵州 贵阳 550025) 摘 要：为建立山羊痘病毒 (goatpoxvirus，GPV)的SYBRGreenI荧光PCR方法，根据GPV的反向末端重复序列 (InvertedTerminalRepeat，ITR)的核苷酸序列设计引物。以此引物和 山羊痘皮肤痘疹提取的DNA为模板 ，建立 并优化SYBRGreenI模式荧光PCR检测 GPV的ITR基因的方法，并与普通PCR方法进行敏感性比较。结果表 明，此次建立的检测GPV的SYBRGreenI荧光PCR方法能检测 出7×10拷贝数的DNA模板，此法比文献报道 的普通PCR法更敏感、准确、快速。 关键词：山羊痘病毒；实时定量PCR；熔解曲线 中图分类号：$852．654 文献标识码：A 文章编号：1008—0457(2008)06—0503—05 Establishmentofreal——timePCR techniqueforgoatpoxvirusdetectionusingSYBR GreenI LUO A—dong。TANG Yuan ，WEN Ming ·¨ YUE Jun，CHENG Zhen—tao。 ， ， ，XU Chun-zhi‘(1．CollegeofAnimal Science，Guizhou University，Guiyang Guizhou 550025，China；2．AnimalDisease Institute，Guizhou University， GuiyangGuizhou550025，China) Abstract：Apairofpfime~weredesignedfordetectionofGoatpoxviurs(GPV)ITR(InvertedTerminalRepeat)gene byusingSYBR GreenIreal—timePCR technique．TheresultsshowedthatSYBR GreenIreal—timePCR technique coulddetect7X10 copiesoftheDNA template，thisassaywasmoresensitivethantheconventionalPCR assayreported previously． K words：goatpoxviurs；real—timequnatitativePCR；meltingcurve． 山羊痘 (Goatpox)是由羊痘病毒属(Capripoxvirus)山羊痘病毒(Goatpoxvirus，GPV)引起山羊及绵羊 的一种急性、热性、高度接触性传染病。一年四季均可发生，春秋常见，不分性别、年龄、品种。该病的流行 已有很久的历史，主要分布在北美、中非、印度次大陆和西南亚 J，特别是以养羊业为重要农业经济结构 成分的地区。其发病率和死亡率高，主要以全身皮肤、呼吸道和消化道黏膜出现痘疹为特征，也可引起妊 娠母羊流产，常并发或继发感染。给养羊业，特别是集约化养殖带来巨大经济损失，并严重影响国际贸易， 被世界动物卫生组织 (OIE)列为A类重大传染病，我国也将其列为一类重大动物疫病，其动物和动物产品 被严格限制进出口E3]。据报道，近几年我国的江苏、广东、贵州、山东、浙江、广西、甘肃、黑龙江、福建等地 均有该病发生，有的地区呈暴发流行 J，对养羊业造成严重的危害和巨大经济损失。 检测 GPV的方法较多，如病毒培养、琼脂扩散、对流免疫电泳等，但常规的病毒学试验、血清学试验和 PCR 用于检测GPV存在费时、费力、特异性和敏感性不高等缺点。实时荧光定量PCR技术是一种新型 扩增待检基因的方法，采用 “闭管”操作，具有操作简便、结果直观、敏感性高、特异性强、重复性好、耗时短 收稿 日期：2008—09—2