双杂交系统筛选与AID相互作用蛋白的初步研究.pdfVIP

维普资讯 第 {{卷 第 3朗 厦f]大学学报 (自然科 学版 ) ＼t)1．¨ NO．3 2o05年 5月 JournalofXiamenUniversitY (NaluralS ience) M av 2()o5 · 快 讯 · 双杂交系统筛选与 AID相互作用 蛋 白 的 初 步 研 究 周芳芳 ，李志东 ，王蔚蔚 ，刘润 中 ，洪水根 ，许华曦 ，陈晔光 (1．厦门大学生命科学学院 ．福建 厦门 36l005； 2．生物膜与膜生物工程 国家重点实验室，清华大学生物科学与技术系．北京 100084) 摘 要 ：AID(APPintracellulardomain)是由淀粉样前体蛋白APP经 一分泌酶切割产生的胞 内端 ．它可能参与细胞凋亡． 基因转 录等活动 ．并对阿尔茨海默 氏症的形成有一定影响．为进一步研究 AID 的功能 ．在本实验 中．我们用 AID为诱饵蛋 白．运用酵母双杂交系统筛选与其结合的蛋白，得到其中两个阳性克隆 ．一个为 RPS21．另一个为 FLJ20551．接着又在酵 母体系用 半乳糖苷酶报告基因验证了它们 的相互作用．并在哺乳动物细胞 中用免疫共沉淀的方法再次验证了它们相互 作用的特异性．这些结果表明 RPS2l和 FLJ2055l可能通过与 AID相互作用而影响阿尔茨海默氏症的形成． 关键 词 ：淀粉样前体蛋白；AID；酵母双杂交；RPS2l；FLJ20551 中图分类号 iQ29l 文献标识码 ：A 文章编号 ：0438—0479(2005)03—0299—05 阿尔茨海默 氏症 (AlzheimerDisease，AD)是近年 AID较易降解 ，最近才被检测到并开始研究其功 日趋严重 的老年疾病之一 ，一般具 有 4种特征 ：1)在 能．目前 的研究结果表 明AID的主要作用是在核 内调 脑区由AI3(Amyloid13-peptide)形成 的淀粉样沉淀 ， 节基 因转录或影响细胞周期等 ，还有一些报道 俗称老年斑 ；2)由TAU蛋 白高度磷酸化引起 的神经 暗示 AID可能还影响 DNA修复 l【，胆 固醇代谢 ，钙 纤维缠结；3)神经细胞凋亡 ；4)神经递质缺失L】]． 信号的调节L1和 Notch通路等 ．Kang等人认为 由 A 是一种淀粉样蛋 白，它 由前体蛋 白(Amyloid 于APP在结构上像细胞表面受体，而 AID又缺少明 precursorprotein，APP)经 p一分 泌酶 (一secretase)和 显 的酶活性 ，所 以很可能 AID是通过与它相互作用 的 Y一分泌酶 (7一secretase)剪切形成．APP是 I型跨膜蛋 蛋 白行使它 的功能u ．因此 ，AID的结合蛋 白受到越 白，人 的 APP基 因经不 同的 mRNA剪切方式编码一 来越多的重视 ．已报道 的有 GTP结合蛋 白Go】【，接 系列的 APP蛋 白(695，7l4，751和 770个氨基酸)，它 头蛋 白Fe65和 X11【】，UV—DDB】【，组氨酸 乙酰转移 的胞外区可 以被 a一分泌酶(a—secretase)或 p一分泌酶切 酶Tip60]和 MAPK激酶 JNK结合蛋 白JIP一1l】等， 割，产生可以分泌到胞外的可溶性 N端和仍然 留在膜 但它们与 AID相互作用 的确切机制并不十分清楚．为 上的 C端 ．这些分泌形式的 N端可 以参与细胞粘连 ， 了找到其它调节途径并进一步研究 AID在阿尔茨海 神经突生长和突触可塑性等活动 J．由 a一分泌酶切 默 氏症 中的作用 ，我们 以AID为诱饵蛋 白构建质粒， 割产生 的具有 83个氨基酸残基 的 C83和由