果蝇新型碱性磷酸酶相关基因CG6236敲除及表型分析.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2012, 34(5): 424–431 http ://www.cj 果蝇新型碱性磷酸酶相关基因CG6236的 敲除及表型分析 1 1 2 2 3 3* 缪海锋　方可欣　黄爽爽　金龙金　林鑫华　吴一卉 1 2 ( 温州医学院眼视光学院, 温州325027; 温州医学院检验医学院、生命科学学院, 温州325035; 3 中国科学院动物研究所生物膜与膜生物工程国家重点实验室, 北京100101) 摘要 碱性磷酸酶广泛存在于人体各器官中, 其水平异常与一系列疾病有关, 但其在发育中 的具体作用机制尚不明确。该文以果蝇为模式生物, 研究一个新型碱性磷酸酶样蛋白基因CG6236 P- CG6236 CG6236 在发育中的功能。利用 因子介导的不精确剪切获得 缺失突变体果蝇品系, 发现 纯合突变体半致死, 存活的幼虫及成蝇腹部出现黑色素瘤样表型。在细胞中表达CG6236融合蛋白, 发现其定位于细胞质中。另外, 缺失或过表达CG6236均不影响Wingless和Hedgehog信号通路。综上, 该研究首次获得CG6236基因缺失突变和转基因果蝇品系, 并观察了缺失CG6236果蝇的表型, 为进 一步阐明基因CG6236的功能及作用机制奠定了基础。 关键词 CG6236; ; ; ; 碱性磷酸酶 基因缺失 黑色素瘤 果蝇 碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)是一类 结构域DUF229(protein of unknown function DUF229) 。 将核酸、蛋白、生物碱等底物去磷酸化的酶, 即通 目前研究认为, DUF229结构域参与线虫类幼虫期 过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去, 并 发育的生长调控, 但具体分子机制尚不清楚。基因 生成磷酸根离子和自由的羟基。它广泛存在于人体 Y41E3.1是CG6236在线虫中的同源基因, Piano等[7] 各脏器器官中, 目前, 发现有四种同功异构酶[1] Maeda [8] RNAi Y41E3.1 , 分 和 等 通过 的方法筛选发现, 可 为组织特异性和非特异性两种类型, 前者存在于肠、 能与线虫胚胎极体形成、母体生殖力及个体健康有 胎盘、生殖细胞中, 后者主要存在于肝脏、骨髓及肾 关。目前, 对于基因CG6236的功能研究在果蝇中还 [2] CG6236 脏中 。碱性磷酸酶在发育中具有重要的生物学作 未见相关报道。本课题首次获得 基因缺失和 用, 并且其水平异常与一系列的疾病有关, 如炎症[3-4] 、 转基因果蝇, 并初步观察了基因CG6236的表型, 为进 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)[5] 、帕哲病 一步研究CG6236的功能, 进而研究该类碱性磷酸酶 (Paget’s disease, PD)[6]等。 样蛋白在发育中的功能奠定了基础。 碱性磷酸酶是碱性磷酸酶超家族(alkaline phos- p