MPN患者JAK2基因V617F点突变的检测及意义.pdfVIP

山东医药2011年第51卷第3O期 MPN患者 JA 基 因V617F点突变 的 检测及意义 张树鹏 ，赖仁胜 ，杜益群。，谢 玲 ，吴晓斌 。郑燕影 。陈 劫 。赵苏苏 。李 惠 (1南京中医药大学，南京210029；2南京中医药大学第一附属医院) 摘要：目的 探讨JAK2基因V617F点突变在骨髓增殖性肿瘤 (MPN)中的发生情况及其意义。方法 本组受 检者共 100例。MPN患者82例，其中真性红细胞增多症 (eV)20例 ，有红细胞增多但未能诊断为PV者 10例，原发 性血小板增多症 (ET)14例，有血小板增多但未能诊断为ET者 13例，原发性骨髓纤维化(PMF)9例 ，慢性髓性白 血病(CML)2例，其他MPN6例，其他不明原因白细胞升高患者 8例；另有急性白血病 (AML)1例 ，骨髓增生异常 综合征(MDS)10例 、腔隙性梗死3例，慢性肾炎 1例，大 B细胞性淋巴瘤 1例，异体胎肝移植患者 1例 ，正常体检者 1例。提取100例受检者外周血液及骨髓样本中有核细胞DNA，采用直接测序法进行JA 第12、14外显子突变热 点的检测。结果 100例样本中，有52例检测了第 12、14两个外显子 ，48例仅检测第 14外显子。未发现第 12外 显子突变。V617F及其他突变总检出率为38％(38／100)。PV、ET、PMF、CML、其他 MPN、其他不明原因白细胞升 高患者中均检测到不同比例的JAK2基因V617F点突变；而 18例非MPN患者样本中均未发现V617F点突变，两组 相比，P0．01。结论 JAK2基因突变在MPN的发生率高于其他血液疾病，可作为诊断MPN的一项重要参考指 标。 关键词 ：Janus激酶2；基因突变；基因直接测序；骨髓增殖性肿瘤 中图分类号：R551．3 文献标志码：B 文章编号：1002-266X(2011)3O-0105-02 Janus激酶(JAK)是一种非受体型酪氨酸蛋白 性白血病 (CML)2例，其他 MPN6例，其他不明原 激酶。JAK2是 JAK家族中受到高度关注的一员， 因白细胞升高患者 8例；另有急性 白血病 (AML)1 其广泛分布于体细胞的胞质中，参与造血和免疫等 例，骨髓增生异常综合征 (MDS)10例，腔隙性梗死 系统的信号转导。多项研究 ¨ 证实，真性红细胞 3例 ，慢性肾炎 1例，大 B细胞性淋巴瘤 1例，异体 增多症 (PV)、原发性血小板增多症(ET)、原发性骨 胎肝移植患者 1例，正常体检者 1例。样本中91例 髓纤维化 (PMF)等疾病 中存在 JAK2激酶 V617F 为抗凝血，8例为石蜡包埋骨穿组织学检测样本，1 例为骨穿送检骨髓液。 点突变。该突变位点在 DNA序列的第 1849位碱 1．2 方法 基，由胸腺嘧啶代替了原有的鸟嘌呤(G_+T)，导致 1．2．1 DNA的提取 用OMEGAbio—tek血液 DNA 编码蛋白第 617位的苯丙氨酸被缬氨酸代替，引起 提取试剂盒及组织 DNA提取试剂盒 ，按照说明书操 该基因编码的酪氨酸激酶活性增高。研究证实 J， 作。用 eppendorf核酸定量仪选择 dsDNA为测定 目 JAK2V617F是发生于干细胞水平的突变，是PV、ET 标测定DNA浓度，要求样本 260nln吸光率大于 等骨髓增殖性肿瘤 (MPN)的主要分子致病机制和 0．05，DNA浓度大于2．0 g／l。 诊断标志。2007年 11月 一2010年 l1月，本研究分 1．2．2 PCR扩增 ①PCR引物：检索 NCBIJAK2 析了JAK2基因V617F点突变在 MPN患者中的发