基因拷贝数和甲醇浓度对重组毕赤酵母产华根霉脂肪酶的影响.pdfVIP

基因拷贝数和甲醇浓度对重组毕赤酵母产华根霉脂肪酶的影响.pdf

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微生物学通报 MAR 20, 2011, 38(3): 301−309 Microbiology China © 2011 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 基因拷贝数和甲醇浓度对重组毕赤酵母产 华根霉脂肪酶的影响 李飞 喻晓蔚 沙冲 徐岩* (江南大学生物工程学院 教育部工业生物技术重点实验室 江苏 无锡 214122) 摘 要: 将华根霉脂肪酶基因克隆到甲基营养型毕赤酵母中表达, 以甲醇利用快型菌株为宿主, 在7 L 发酵罐水平对脂肪酶基因拷贝数分别为3 、5 、6 的3 株基因重组菌——XY RCL-3 、XY RCL-5 、 XY RCL-6 进行高密度发酵调控, 同时研究了甲醇浓度对表达华根霉脂肪酶的影响。结果表明, XY RCL-5 在相同条件下发酵产酶能力高于 XY RCL-6 和 XY RCL-3, 最适甲醇诱导浓度控制在 0.1%±0.02%时, 酶活可达到 12 500 U/mL, 菌体干重达到204 g/L, 蛋白浓度也能达到8.02 g/L。 关键词: 基因拷贝数, 甲醇诱导浓度, 毕赤酵母, 华根霉脂肪酶 Impact of gene dosage and methanol concentration on Rhizopus chinensis recombinant lipase production in Pichia pastoris * LI Fei YU Xiao-Wei SHA Chong XU Yan (Key Laboratory of Industrial Biotechnology , Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China) Abstract: The Rhizopus chinensis lipase genes was cloned and expressed in Mut+ methylotrophic Pichia pastoris with different gene dosage. The high-density fermentation of the recombinant Pichia pastoris with gene dosage of three (XY RCL-3), five (XY RCL-5) and six (XY RCL-6) was investigated on 7-liter fermenter. The impact of methanol concentration on Rhizopus chinensis lipase expression was also explored. Our

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