栉孔扇贝精子膜蛋白的提取分离及初步鉴定-栉孔扇贝精子膜.pdfVIP

维普资讯 第 29卷 第 2期 海 洋 水 产 研 究 Vo1．29。NO．2 2008年 4月 MARINE FISHERIESRESEARCH Apr．。2008 栉孔扇贝精子膜蛋白的提取分离及初步鉴定 刘丽燕 杨爱国 王清印 周丽青 刘志鸿 (农业部海洋渔业资源可持续利用重点实验室 中国水产科学研究院黄海水产研究所 ，青 岛266071) (上海水产大学生命学院，200090) 摘要 通过 SDS_PAGE 电泳，从提取液的倍数 、提取 时间、TritonX_100的浓度 、SDS的有无等 4 个方面对提取条件进行优化 ，确定栉孔扇贝精子膜蛋 白的最佳提取条件是 ：将精液 150g离心去除精 原细胞 ，0．1mol／LPBS缓冲液清洗两次，0．1mol／LTris—HC1缓冲液清洗两次，3000g离心 10 min(4℃)得精子悬液；然后 向精子悬液 中加入 3倍体积含 1 TritonX一100和 0．1 SDS的膜蛋 白 提取液中冰浴振摇 1．5h；4℃，50000g离心 15min，收集上清精子膜蛋白溶液 。SDS电泳 后 ，考马斯亮蓝 R一250染色检测出22种膜蛋 白，分子量在 23～156kDa之 间，PAS染色检测 出糖蛋 白有 13种 ，苏丹黑B染色检测出脂蛋白有 12种 ，其 中既为糖蛋 白又为脂蛋白的有8种 。此研究结果 可为以后进一步分离纯化栉孔扇 贝的精子膜蛋白，研究其在精子发生和受精过程 中的功能及作用提 供基础资料 。 关键词 栉孔扇 贝 精子膜蛋 白 糖蛋 白 脂蛋 白 中图分类号 Q344 文献识别码 A 文章编号 1000—7075(2008)02—0073—09 Extraction andprimaryidentificationofsperm membrane proteinfromChlamysfarreri LIU Li—yan YANG Ai—guo WANG Qing—yin ZHOU Li～qing LIU Zhi-hong (KeyLaboratoryforSustainableUtilizationofMarineFisheriesResources，MinisterofAgrlculture， Yellow SeaFisheriesResearchInstitute，ChineseAcademyofFisherySciences，Qingdao266071) (CollegeofAqua-lifeScienceandTechnology，ShanghaiFisheriesUniversity，200090) ABSTRACT Theconditionsforsperm membraneprotein extraction from Chlarnys，rreri wereoptimizedinfouraspectsbySDS_PAGE electrophoresis：themultiplesofextraction solu— tionvolume，theextraction time，theconcentration ofTriton X一100andtheaddition ofSDS duringthisstudy．Thefinaloptimizedextraction conditionwasthat，thesperm werecentrifuged by 150gtowipeoffspermatogonia；cleanedtwiceinPBSbufferand