血水草白屈菜红碱灭螺效果及对钉螺肝脏损伤机理研究.pdfVIP

分类号 密级 学校代码 10542 学号j00921923011 血水草白屈菜红碱灭螺效果及对钉螺肝脏 损伤机理的研究 The of from Study Eomecon Chelerythrine chionanthaHanceon Molluscicidaleffects and mechanismon liverofthe injury snails 指导教师姓名、职称 黄堕堑堑篮 研 究 方 向——血吸虫病防治 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一零年五月 摘 要 从血水草根及根茎中提取的血水草总生物碱(Eomecon chionantha alkaloids，ECA)被课题组证实具有良好的杀螺作用， 中分离单体白屈菜红碱进行杀螺作用及其杀螺机制研究，为血水草作 为植物杀螺剂开发利用提供新的实验依据。 从血水草粉末中分离CHE。参考WHO规定的“杀螺剂实验室终筛 方法”的浸泡法进行杀螺试验。于20。C、25。C、30。C温度下，观察 48、72、96h死亡率。设去氯水对照组。通过对数据进行逐步回归计 算建立回归数学模型和因素分类区域处理，探讨温度、时间、药物浓 度等各种因素对杀螺效果的影响及变化规律。 以钉螺肝脏为样本，探讨CHE杀螺机理。设置CHE20mg／LlOmg／L、 5mg／L水溶液和清水组25℃浸泡钉螺36h，解剖活螺，分离肝脏，提 取肝细胞DNA，进行DNA琼脂糖凝胶电泳；将肝组织捣碎，制备肝细 胞悬液，用流式细胞术检测CHE溶液是否诱导钉螺肝细胞凋亡。 配制5mg／LCHE的水溶液，浸泡钉螺36h，解剖活螺取肝脏， 提取CHE处理组和清水对照组钉螺肝脏蛋白质，双向凝胶电泳， 2D ImageMaster5．0软件分析图谱，筛选差异蛋白质，并用质谱鉴 定。分析CHE致钉螺肝脏蛋白质表达的变化。 CHE杀螺研究及对钉螺肝脏损伤机制研究发现： 25。C、30。C温度杀螺效果与对照组差异均具有显著性(P(0．05)。 (2)CHE不同浓度、浸泡时间、温度杀灭钉螺的效果不同。用 SPSSl7．0软件经多元线性逐步回归方法进行统计学分析显示，浓度、 作用时间及温度均为CHE灭螺效果的影响因素。随着药物浓度增高， 温度升高，浸泡时间延长，CHE杀灭钉螺的效果增加。各因素间差异 有显著性(P(0．05)。 (3)钉螺肝细胞DNA琼脂糖凝胶电泳图谱结果显示20mg／L、 10mg／L、5mg／LCHE溶液处理后均未见典型DNALadder；流式细胞 术检测20mg／h、10mg／L、5mg／LCHE溶液处理组和清水对照组的钉螺 肝细胞早期凋亡率分别为5．59％、3．42％、5．71％、3．85％，晚期凋亡 细胞率分别为1．59％、1．31％、2．7％、0。7％…总凋亡率分别为7．18％、 4．73％、8．41％和4．55％；各CHE溶液处理组和清水对照组两组结果比 较近，差异无统计学意义(P0．05)，提示上述各浓度CHE溶液浸 泡后与清水对照钉螺肝细胞的凋亡无差别。 (385±8)个蛋白质点，成功鉴定了其中4个蛋白点，分别是肌动蛋 ㈣必 白、甘氨酸烯醇样蛋白、13肌动蛋白。这些蛋白在CHE处理后表达 均下调。 从以上研究结果得出如下结论： (1)CHE