慢性乙型肝炎合并肝癌患者淋巴细胞的彗星试验分析.pdfVIP

维普资讯 820-821 - 05,21(4)： 820 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysio|ogy 20— — [文章编号] 1000—4718(2005)04一o820—02 慢性乙型肝炎合并肝癌患者淋巴 细胞的彗星试验分析* 何 玮 ， 唐永煌 ， 梁旭竞 ， 黄耀熊 ， 张立伐 ， 龚晓兵 ， 蔡冬青 (暨南大学 附属第一医院传染病学教研室 ，生物医学工程研究所 ，广东 广州510632) [摘 要] 目的：观察慢性乙型肝炎合并肝癌患者外周血淋巴细胞DNA的损伤情况。方法：利用先进、快速、 灵敏、客观的彗星试验及 IMI1．0彗星分析软件 ，对慢性乙型肝炎合并肝癌患者淋 巴细胞 DNA损伤进行观察。结 果 ：慢性乙型肝炎合并肝癌患者外周血淋巴细胞的 “彗星”尾长、尾％DNA、尾惯量和尾矩4个指标均显著高于健康 人(P0．o5)。结论：慢性乙型肝炎合并肝癌患者外周血淋巴细胞的DNA损伤明显，其原因可能是HBVDNA整合 到淋巴细胞内，导致淋巴细胞 DNA高级结构发生了变化。 [关键词] 肝炎，乙型，慢性；肝肿瘤；淋巴细胞；DNA；彗星试验 [KEYWORDS] HepatitisB，chronic；Liverneoplasms；Lymphocytes；DNA；Cometassay [中图分类号] R363 [文献标识码] A 肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma，HCC)是世界上最常见 — 6o岁，男9例 ，女 1例。健康 自愿者排除甲、乙、丙、丁、戊型 的十大恶性肿瘤之一 ，在我国，HCC占恶性肿瘤死亡的第 3 肝炎病毒感染 ，并排除酒精性肝炎及 自身免疫性肝炎，近3个 位…。尽管其发生是一个由多因素诱导、多基 因参与、多基 月内未患过流行性感 冒、麻疹、腮腺炎等病毒感染性疾病。1O 因突变积累的漫长的多阶段过程，但其中乙型肝炎病毒(hep— 例健康者年龄在20—4o岁，男7例 ，女3例。 atisBvirus，咖v)的感染在 HCC病因学中的重要作用已得 2 方法 到证实，被视为HCC病因学的重要因素。肝细胞内HBVDNA 2．1 外周血淋巴细胞提取 按照 Tice等-2j的方法略加改 的存在造成染色体、DNA的损伤 ，与肿瘤形成关系尤为密切。 动。取患者静脉血 1mL，用PBS2倍进行稀释，缓慢加入 1mL 目前已明确：HBV是一种独特的、不严格的嗜肝病毒，即是一 淋巴细胞分离液中，2000Xg离心20min，吸取淋巴细胞层， 种泛嗜性病毒 ，除了侵犯肝细胞外，还可 以在肝外组织如外 再以2倍体积的PBS洗 1次 ，弃上清，备用。 周血淋巴细胞中发现。单细胞凝胶电泳(single—cellge1dec— 2．2 单细胞凝胶 电泳 取 100止 0．5％(w／v)正常熔点琼脂 trophoresis，SCGE)试验又称彗星试验 (cometas )是一种检测 糖 (55±2)oC加在磨毛的载玻片上，用盖玻片压平胶面，4℃ 单个哺乳动物细胞DNA损伤的技术。本文应用SCGE技术对 放置 10min，然后轻轻将盖玻片移开制成底层胶。取 50止 慢性 乙肝合并肝癌患者外周血淋巴细胞DNA损伤进行研究， 0．6％低熔点琼脂糖 (37℃)与等体积的淋巴细胞悬液混匀， 以探讨HBV引起HCC的机制。 迅速铺于底层胶上，用盖玻片压平 ，4℃放置 10mill，移去盖 材 料 和 方 法 玻片。取 100止 0．6％低熔点琼脂糖 (37℃)加在第 2层胶 上 ，用盖玻片压平 ，4℃放置 10mil