艾迪注射液对氯化钴诱导的Hela细胞缺氧诱导因子-1蛋白稳定及转录活性的影响研究.pdfVIP

维普资讯 北京中医药大学学报 第31卷第 1期2008年 1月 · 42 · JournalofBeijingUniversityofTraditionalChineseMedicine Vo1．31No．1 Jan．2008 艾迪注射液对氯化钴诱导的Hela细胞缺氧诱导因子一1 蛋白稳定及转录活性的影响研究 董云巧 顾金保 顾立刚 李佩文 (1北京中医药大学基础医学院病原学系 北京 100029；2南方医科大学病原生物学教研室； 3卫生部中日友好医院肿瘤科) 摘要：目的 研究抗癌中药复方艾迪注射液对缺氧诱导因子一1(HIF一1)蛋 白稳定性及转录活性的影 响。方法 MTT法检测艾迪注射液对Hela细胞增殖的影响。构建缺氧诱导因子一1的荧光素酶报 告基因Hypoxia—responsiveelement—luciferasereportorgene(HRE—LUC)利用双荧光素酶顺式报告系 统，氯化钴模拟化学缺氧条件，检测不同浓度艾迪注射液对 HRE—LUC相对荧光素酶值的影响。 Westernblot在蛋 白质水平进一步验证在此条件下艾迪注射液对 HIF1仅亚基蛋 白稳定性的影响。 RT—PCR进一步验证在此条件下艾迪注射液对 HIF一1下游靶基因腺苷酸激酶3(AK3)转录水平的 影响。结果 艾迪注射液对Hela细胞增殖有明显的抑制作用。艾迪注射液200、300、400m【／L培 养基组特异性地抑制缺氧条件下Hela细胞HRE—LUC相对荧光素酶值(P0，05)。且抑制作用随 剂量增加而增强；Westernblot显示艾迪注射液抑制氯化钴诱导的HIF一1仅蛋 白聚集，且抑制作用随 剂量增加而增强；RT—PCR证实不同剂量的艾迪注射液均有抑制AK3基因转录的作用。结论 艾 迪注射液对Hela细胞的增殖具有明显的抑制作用，其抗癌机制可能与抑制HIF一1仅亚基蛋 白稳定 性及降低其转录活性有关。 关键词：缺氧诱导因子一1；双荧光素酶报告系统；艾迪注射液 中图分类号 ：R285．5 EffectofAidiInjectionontheexpressionofHIF-1inducedbycobalt chloridein Helacell DONGYun—qiao ，GUJin—bao ，GULi—gang 。LIPei—wen (1DepartmentofPathogenicBiology，BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing 100029； 2DepartmentofPathogenic Bioloyg ，Southern MedicalUniversity；3 DepartmentofOncoloyg China— 。 JapanFriendshipHospita1) Abstract：Objective ToverifytheeffectofAidiInjectionontheproteinstabilityandtranscriptional activationofhypoxia．induciblefactor一1(HIF一1)inducedbycobaltchlorideinHelacellline．Methods Cellproliferation was detected by Mrrr． Hypoxia—responsive element—luciferase reportor gene was constructedand dualI_luciferasec／s—-reporting systemswasused to detecttheprotein