大肠杆菌中外源蛋白高效表达的影响因素及策略研究的新进展.pdfVIP

— 1100 — Chin J Lab Diagn ,September ,2006 ,Vol 10 ,No . 9 2004 ,72 :416 . patients with early Bcell chronic lymphocytic leukemia but is prognostic [ 13 ]Molica S ,Vitelli G ,Levato D ,et al . Serum angiogenin is not elevated in factor for disease progression . Eur J Haematol ,2004 ,73 :36 . (收稿 日期 :2005 - 07 - 12) ( ) 文章编号 :1007 - 4287 2006 09 - 1100 - 04 大肠杆菌中外源蛋白高效表达的影响因素 及策略研究的新进展 卢晟晔 ,王丽颖 (基础医学院临床医学七年制 2001 级 ;基础医学院分子生物) 　　大肠杆菌表达系统因为其遗传背景清楚 ,低成本 ,高生 经统计 E. Coli 中编码含量丰富蛋白质氨基酸的密码子 产率 ,特征明确 ,兼容多种抗体[ 1] 使之成为 目前最常用的外 中 ,属于稀有密码的是 AGA 、AGG、ATA 、CCG、CCT 、CTC 、CGA 、 源蛋白原核表达系统 。近年来 ,重组大肠杆菌的高密度发酵 GTC 等[3 ] 。 是现代基因工程产品大规模生产的重要技术 。采用高密度 13 　mRNA5 ’非编码区( 5 ’UTR) 　5 ’UTR 的序列及长度均 发酵技术 ,提高菌体的发酵技术 ,提高菌体的发酵密度 ,最终 影响着外源基因的表达 。SD 序列位于密码子的上游 3 - 11 提高产物的比生产率 ,不仅可以减少培养体积 、优化下游分 个核苷酸处 ,与核糖体 16SrRNA 的 3 ’互补配对 ,一般为富含 离提取 ,还可以缩短生产周期 、降低生产成本 ,从而极大地提 GA 的 5 个氨基酸 ,各种蛋白的 SD 序列结构大致相同[6 ] 。起 高在市场上的竞争力 。然而在研究高效发酵过程中 ,人们往 始密码子与 SD 序列间的适宜距离为 4 - 10 个氨基酸 。UTR 往会遇到表达效率难以得到最大限度的提高与产率较低等 太长或太短都会造成 40S 亚基的识别障碍 ,影响外源基因的 β 有效表达 。 酪蛋 白的 5 ’非翻译区能增强报告基因的表 问题 。因此本文将就外源基因本身特性对于高效表达的影 2 响 ,表达系统的特性对于高效表达的影响 ,外源基因与系统 达[7 ] 。 ( ) 间的相互作用及其他因素等方面阐明外源基因高效表达的 翻译起始区 TIR 的二级结构对于翻译的发生也有影 影响因素 。最终总结出一套高效表达的策略 。 响 。TIR 是翻译起始的顺式序列 。降低 TIR 的二级结构的稳 1