聚．谷氨酸的分离提纯.pdfVIP

维普资讯 舀盈墨弱圆 锄 聚 ．谷氨酸 的分离提纯 吕 莹 郝紫徽 李 虹 陈 辉 1(中国食品发酵工业研究院，北京 ，100027) 2(中国农业大学食品科学 营养工程学院，北京 ，100083) 摘 要 采用 乙醇沉淀 、酸沉淀、透析等方法从纳豆中分离提纯 了 一PGA。150g纳豆中分离提纯出0．5925g PGA，提取率 0．39％，纯度 75％。 关键词 聚 一谷氨酸(一PGA)，纯化 聚 7一谷氨酸 [7-Poly(glutamicacid)，7一PGA]是由 1．2．5 氨基酸定量测定 芽孢杆菌合成的一种胞外异形肽，由D 型或L型谷 水解后的7-PGA溶液用氨基酸 自动分析仪测定 氨酸通过 7一酰胺键连接而成 的氨基酸均聚物 ，通常 各种氨基酸含量。 由5000个左右的谷氨酸单体组成，相对分子量一般 1．2．6 了一PGA 的分离提纯 在 10万～100万之间。做为一种可完全降解 的新型 将 150g纳豆加入 150mL蒸馏水在摇床振荡约 天然高分子材料 ，它在食 品、医药 、农业 、日常用品和 1h，过滤 ，滤液离心 (6000r／min，30min)，收集 清 塑料等领域具有广泛 的应用潜力 。1990年代 以来 ， 液 ，调 pH2．0，在冰箱中放置过夜。有沉淀析 出，低 有关 7-PGA 的培养条件 、分离纯化 、深层发酵 、生物 温离心(6000r／min，30min)，收集沉淀。用 150mL 合成途径以及应用开发等研究一直是 日本、韩国、美 蒸馏水复溶，调 pH2．0后 ，以2倍体积的乙醇沉淀， 国等国家的研究热点，国内关于 7一PGA的研究尚处 冰箱中放置过夜。离心 (12000r／rnin，20min)收集 于起步阶段。文中确定了从纳豆 中分离提纯 7-PGA 清液 ，调 pH4．0，同时加入少量低 分 了量的固体钠 的方法 。 盐 ，边搅拌边有 白色絮状物析 出，低温离心 (6000r／ rain，5min)，收集沉淀。用0．05mol／lpH 7．5的磷 1 弑料与力法 酸缓冲液 复溶，复溶液 中加入蛋 门酶 k(添 加量 为 1．1 材 料 0．15ffg／mgPGA)，于 37℃进行水解 ，水解液以蒸馏 纳豆 (燕京牌小粒纳豆 ，北京燕京中发生物技术 水为透析液透析过夜，将透析液真 冷冻干燥 ，得 白 有限公司)。 色的7一PGA粉末(所有低温条件均为4C)。 1．2 方 法 1．2．1 蛋 白含量测定 2 结果与分析 采用 Folin一酚法_2J，以牛血清 白蛋 白为标准 蛋 2．1 ．PGA水解物的纸层析 白。 由图 1可 以看 出，水解前 7一IGA样 品显色后无 1．2．2 多糖含量测定 显色点 ，水解后的样品有明显谷氨酸 色点 ，无其他 采用苯酚一硫酸法 。以葡萄糖 (分子质量为 30万 u)作为标准。 1．2．3 了一PGA 的水解 称取纯化的 7-PGA 13．6mg，定容至 5mL。再 从 中吸取 1．1884g，放 入水解管 中，加入 10mL6 mol／L的HCI，抽真空封 口，放入 105℃的烘