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药用植物铃兰中吖丁啶-2-羧酸的测定 刘惠文 （中国林科院生态环境研究所 北京 100091） 提 要 使用强阳离子交换柱分离、pH梯度洗脱、柱后衍生、荧光ex＝338nm和em＝425nm检测的高效液相 色谱法，成功地分析了药用植物铃兰中的吖丁啶-2-羧酸，方法回收率为96.4％。 关健词 高效液相色谱法，铃兰，吖丁啶-2-羧酸 分类号 O658/R9 1 前言 表 1 梯度洗脱程序 早在50年代就有文献报道，在百合、铃兰等药 用植物中存在一些新的氨基酸和亚氨基酸。这些含 氮物质在植物含氮物质中占有很大的比例。而吖丁 啶-2-羧酸 俗（称铃兰氨酸）就是这些新含氮物质中 的一种。它是一种环状结构的亚氨基酸。从人们对这 种亚氨基酸的确认到早期分离，多使用茚三酮衍生 的纸色谱法。由于分离手段相对落后而使该物质与 其它一些含氮物质不能有效的分离，给它的定量带 2.3 洗脱液、氧化液和衍生液的配制 来一定的困难。本文使用强阳离子交换柱分离、pH A溶液 :取19.60g柠檬酸三钠二水合物，10g 梯度洗脱、柱后衍生的高效液相色谱分析法，快速、 苯酚，用 1L水溶解混匀，用硝酸调解溶液pH3.10 准确地对该物质进行了分离和检测。 ±0.02，经0.45m滤膜抽滤备用。 2 实 验 部 分 B溶液 :取 21.0g硝酸钠 ，1.5g硼酸 ，用 1L水 溶解混匀，以质量分数为20％的氢氧化钠溶液调节 2.1 仪器与试剂 溶液pH9.60 0.02,经0.45m滤膜抽滤备用。 仪器:美国Waters公司氨基酸分析仪，包括两 次氯酸钠氧化液 :在1L的pH10.40硼酸钾溶 台M-510高压泵、一台M-730数据处理机、一台M- 液中加入2mL质量分数为 5％的次氯酸钠溶液，混 710B自动进样器、一台M-680程序控制器、一台M- 匀后抽滤备用。 470全波道扫描可调波长荧光检测器；柱后衍生系 OPA衍生液:用10mL甲醇溶解 700mg邻苯 统为二连泵和柱温控制器。 二甲醛，加入2mL的2-巯基乙醇，摇匀倒入 1L的 试剂:柠檬酸三钠、苯酚、氢氧化钠、硝酸钠、次 pH10.40硼酸钾溶液中，混匀后用0.45m滤膜抽 氯酸钠、氢氧化钾、硼酸为分析纯；甲醇、邻苯二 甲 滤备用。 醛、琉基乙醇为优级纯；吖丁啶-2-羧酸为色谱纯；二 2.4 标准溶液及样品制备 次重蒸水。 2.4.1 标准溶液制备 2.2 色谱条件 准确称取吖丁啶-2-羧酸标准品5mg放入 10 色谱柱:AA分析柱，强阳离子交换树脂 (R- mL容量瓶中，用0.2mol/L氢氧化钠溶液溶解，二 SO3Na+)30cm 0.4cm；柱温:65℃；流动相:pH 次重蒸水定容至刻度，摇匀备用。 3.10的缓冲液A与pH9.60的缓冲液B,pH梯度 2.4.2 样品制备 洗脱；流速 :0.40mL/min;柱后反应泵流速 :0.8 游离吖丁啶-2-羧酸提取:准确称取研碎、脱脂、 mL/min每（台泵 0.4mL/min）；检测器波长:x＝ 脱色后的铃兰植物样品5g，放入250mL三角瓶 338nm,m＝425nm。梯度程序见表l