携带人白细胞介素18基因的复制缺陷型腺病毒载体的构建、鉴定和滴度测定.docVIP

携带人白细胞介素18基因的复制缺陷型腺病毒载体的构建、鉴定和滴度测定 作者：毛立军，郑骏年，郑典宝，郝林，郑宏祥，裴东生 【关键词】 白细胞 　　摘要 :目的 构建人白细胞介素18（IL-18）基因复制缺陷型腺病毒表达载体。 方法 以质粒pJWIL-18为模板，设计并合成上、下游引物，利用多聚酶链反应（PCR）扩增获得IL-18基因片段，酶切后克隆至pCA13质粒，构建重组质粒pCA13IL-18。鉴定正确后，将pCA13IL-18与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染HEK293细胞，9～12天出现病毒空斑。提取重组腺病毒的DNA，进行PCR鉴定。大量扩增后，氯化铯梯度离心纯化腺病毒，测病毒滴度。 结果 酶切分析、序列测定、PCR验证表明，IL-18基因成功克隆到复制缺陷型腺病毒载体中。 结论 成功构建了表达人IL-18基因的复制缺陷性腺病毒载体。 　　关键词 :白细胞介素18;腺病毒载体 　　Abstract:Objective To construct the replication-deficient recombinant adenoviruses vector expressing IL-18gene.Methods To get human IL-18template DNA seque