异种EGFR胞外区重组DNA疫苗与蛋白质疫苗抗小鼠Lewis肺癌的作用研究.pdfVIP

肿瘤 2009年3月第 29卷第 3期 TumorVo1．29，No．3，March，2009 ·195 · DOI：10．3781／j．issn．1000-7431．2009．03．001 ~BasicReS曲rch 基础碲：窍 异种 EGFR胞外区重组 DNA疫苗与蛋 白质疫苗抗小 鼠Lewis肺癌 的作 用研究 吴 永 ，张培德。，唐 亮 ，谈立松。，张尚权。 (1．复旦大学生命科学学院生物化学系 ，上海 200433；2．同济大学医学院附属上海市肺科医院肺癌免疫研究室，上海 200433；3．中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 ，上海 200031) [摘要] 目的：构建异种表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)胞外区重组DNA和蛋 白质疫苗 ，观察其 对小鼠Lewis肺癌的抗肿瘤作用。方 法：克隆鸡源性EGFR胞外 Ⅱ-Ⅲ区与喀G- 融合基因，构建重组DNA疫苗质粒pVAX1- cEGFR—Fc和原核表达质粒pET28a(+)．S-cEGFR—Fc，后者转化大肠杆菌，将诱导表达的重组蛋白作为蛋白质疫苗。免疫小 鼠 4次后接种Lewis肺癌细胞，19d后处死小鼠，剥离肿瘤称重并计算抑瘤率，检测小鼠血清中抗EGFR抗体效价，并检测特异性 细胞毒性T淋巴细胞 (cytotoxicityTlymphocyte，CTL)活性。结果 ：成功构建异种EGFR胞外 区重组DNA和蛋 白质疫苗。 DNA疫苗组、蛋白质疫苗组和联合免疫组的抑瘤率分别为37％、49％和63％。3组小鼠均检测出抗EGFR抗体和CTL反应。 结论 ：重组疫苗能打破机体对 自身EGFR分子的免疫耐受，诱导特异性免疫反应，对小鼠Lewis肺癌有明显的抑制作用。2种 疫苗的联合应用可进一步加强抑瘤作用。 [关键词] 癌，Lewis肺 ；受体，表皮生长因子；癌症疫苗；免疫疗法，主动 [中图分类号] R73．362；R734．2 [文献标志码] A [文章编号] 1000-7431(2009)03-0195-06 Anti—tumoreffectofrecombinantDNA andproteinvaccinebasedonxenogeneicextracellulardomainofEGFRon Lewislungcancerinmice WUYong，ZHANGPei—de，TANGLiang，TANLi—song，ZHANGShang—quan (1．DepartmentofBiochemistry，Schoolof LifeSciences，FudanUniversity，Shanghai200433，China；2．InstituteofPulmonaryCarcinomaandImmunology，ShanghaiPul— monaryHospital，Ton iUniversity，Shanghai200433，China；3．InstituteofBiochemistry andCellBioloyg ，ShanghaiInstitutes forBiologicalSciences。ChineseAcademyofSciences，Shanghai200031，China) [ABSTRACT] Objective：ToconstructaDNAvaccineandaproteinvaccinebasedonxenogeneicextracellulardomain(ECD)of epidemralgrowthfactorreceptor(EGFR)andtoevaluatetheiranti—tumoreffectonLewislungcancerinmice．Methods：Thisstudy clonedextracellularregionII—m ofEGFRofchickenoriginandfuseditwithFcportionofIgGgenetoconsturctrecombinantDNAvac- cineplasmidpVAX1一cEGFR-FcandprokaryoticexpressionplasmidpET28a(+)-S-cEGFR—Fc．TheplasmidpET28a(+)·S-cEGFR— FcwastransformedintoE．colifollowedbyinductionwithIPrrG．Thei