由漱口液提取人基因组DNA量与质的分析.pdfVIP

· 678 · 中国老年学杂志2009年3月第 29卷 由漱 口液提取人基因组 DNA量与质的分析 刘海军 秦雪娇 张林娜 陈红梅 郭永园 (山东大学齐鲁医院眼科，山东 济南 250012) (摘 要) 目的 评价一种新的基因样本获取办法用于大样本遗传学研究。方法 通过邮寄的方法获得病人的漱 口液(mouthwash)共492份 ， 用氯．酚法提取其中脱落的口腔上皮细胞中的DNA，测定提取数量；通过聚合酶链反应 (PCR)用提取的DNA扩增大分子红视蛋白DNA片段，并将纯 化的DNA产物进行转化生长因子B诱导因子的部分片段基因测序，以评定DNA提取质量。结果 每份样本的DNA提取量中位数为52．63 (10％ 及90％界值分别为16和 143．25 g)，其中10—20ng的DNA即可获得好的PCR扩增产物，并能得到清晰的基因测序结果。结论 用邮寄的方法， 采用生理盐水做漱 口液，采集 口腔黏膜上皮细胞，从中提取的人类DNA的数量和质量均理想，在实际应用中结果可靠。 [关键词】 漱口液；DNA；遗传研究 【中图分类号] R394．3；R77 (文献标识码] A [文章编号] 1005-9202(2009)06-0678-04 CollectionofgenomicDNA oflargesamplesfrom mailedmouthwashes LIUHaiJ·un，QINXue·Jiao，ZHANGLin-Na，eta1． DepartmentofOphthalmology，QiluHospitalofShandongUniversity，Jinan250012，Shandong，China A【bstract】 Objective Toevaluateanewapproachtogeneticcollectionforlargesamplesgeneticstudy．Methods 492mouthwash- eswereacquiredbymail．DNA inexfoliatedoralmucosalepithelialcellswasextractedwithChlore—phenolmethodanditsamountwasragas— ured．DNAsegmentsofredopsinwereamplifiedwithextractedDNAbyPCR，andpartialsegmentsoftransforminggrowthfactor13induced factorinpurifiedDNA weretestedforSequencetoestimatethequalityofextractedDNA．Results ThemedianofextractedDNA ineach smaplewas52．63(g(10％ and90％ criticalvaluewere16and143．25(grespectively)．GoodPCRproductionwasacquiredwith10—20 ngDNA ，andcleargenesequencingconsequencewasobtained．Conclusions ThequantityandqualityofDNAextractedfrom oralmucosal epithelial ceHsinsalinemouthwashesbymailareideal，whichisreliableinpractice． K【eywords】 Mouthwashes；DNA；Geneticstudy · 在临床疾病的遗传学及分子流行病学研究中，许多研究对 员会及英国卡迪夫大学伦理道德委员会的要求，所有参与者均 象在广义上是作为 “正常”人群的一部分 ，如屈光不正 (近视、 签署了知情同意书。 远视、老视等)患者、肥胖病患者、许多行为遗传学研究变量等， 1．2 漱 口液的获取 这些人群样本通常分布较为分散，而且患者对于疾病治疗的迫 1．2．1 预试验 为选择提取漱 口液的最佳时刻，首先征集了 切程度较轻。在这种情况下，如何取得患者的配合，并且获得 10位志愿者 (学生及工作人员)，在以下四个时刻提取漱 口液： 足够和高质量 的基因样本，是保证遗