生化分离技术第八章电泳.pptVIP

电泳 第八章 电泳 第一节 电泳的基本原理 第二节 电泳及其应用 第一节 电泳的基本原理 第一节 电泳的基本原理 电泳是指带电荷的粒子在直流电场中，向带符号相反的电极的移动，是一种电动现象。在离子移动的物理化学理论中，按照Debye-Hückel的理论，电泳决定于环绕每个离子的离子氛中的扩散双电层。当离子的尺寸越大，溶液的离子强度越高时，这种电泳现象就变得越明显。所以电泳现象中的表面电势和双电层等因素起着决定作用。而这些又与溶液性质及胶体的颗粒所带电荷有关。 第一节 电泳的基本原理 一、电泳的理论基础 1．电荷的来源 固体和液体接触时，二者之间即有电位产生。固体表面带一种电荷、周围的液体带符号相反的电荷，这就叫做偶电层。胶体颗粒表面的电荷来源是：①吸附液体中的某离子，因而带电，液体失去该离子而带相反的电荷。通常阴离子易被吸附而使固体表面带负电。阳离子因水化程度较高，不易被吸附。碳氢化物小滴和气泡也有吸附现象。②作为胶体组成成分的相反符号的离子不等量的进入溶液，例如碘化银胶体在有过量碘离子的情况则带负电，在有过量银离子的情况则带正电。金属氧化物的胶体则受溶液中H+和OH—的影响。③固体表面吸附液体分子，然后这些分子解离。 第一节 电泳的基本原理 蛋白质或其他多电解质则由其本身所具有的功能团的解离而带电。蛋白质具有正负两类解离基，称为两性电解质。蛋白质在酸性介质中带正电，在碱性介质中则带负电。在某一pH值时，其正负电荷相等，此时的pH即称为该蛋白质的等电点。 2．电动现象 由于胶体粒子表面有偶电层、偶电层的固定层和可移动层之间形成电位，叫作电动电位或Zeta—电位(ξ电位)。电动电位的存在引起电动现象。 第一节 电泳的基本原理 二、影响电泳迁移速率的因素 推动粒子运动的力等于离子的净电荷与电场强度的乘积，即： （8-1） 式中 F——运动的力，牛顿； Q——离子的净电荷，库仑； E——电场强度，伏特/米。 第一节 电泳的基本原理 而粒子在运动时又受到—定的阻力，对于球形粒子来说，此阻力服从stoke定律。 (8-2) 式中 ——阻力，牛顿； ——粒子半径，米； ——介质粘度，牛顿·秒/米2； ——泳动速度，米/秒。 当粒了以稳态运动时，电动力与阻力相等，即： 。因此， (8-3) 第一节 电泳的基本原理 电泳迁移率是指在单位电场强度(1伏特/米)时的泳动速度，即： ，代入(8-3)式得 (8-4) 影响电泳迁移率的因素很多，可以分为以下三大类： (1)与被动离子(或粒子)本身的特性有关的因子，如电荷符号和大小、本身的大小和形状、水化程度、解离趋势、两性性质等。 第一节 电泳的基本原理 (2)环境因素，如缓冲液浓度、离子强度、介电性质、化学性质、pH、温度、粘度、有无极性分子存在(因为它可以影响粘度或介电性)等。在有支持物的情况下，影响因素更多，如支持物的吸附作用，不均一性、离子交换能力、电渗现象、虹吸作用、热和蒸发作用等。 (3)所加电场的特性，如强度和纯度(是否杂有交流电)。 这些因素在实验过程中要充分注意，尽量保持条件恒定不变，以便获得可重复的结果。 第二节 电泳及其应用 一、电泳的分类 1．按分离的原理区分 按分离的原理区分，电泳可分为区带电泳(zone EP. ZEP)、移界电泳、等速电泳和等电聚焦电泳。 (1)区带电泳 是在半固相或胶状介质上加一个点或一薄层样品溶液，然后加电场，分子在支持介质上或支持介质中迁移。不同的离子成分在均一的缓冲液(或称载体电解质)系统中分离成独立的区带，可以用染色等方法显示出来，如果用光密度计扫描可得出—个个互相分离的峰，与洗脱色谱的图形相似，电泳的区带随时间延长和距离加大而扩散严重，影响分辨率。加不同的介质可以减少扩散，特别是在凝胶中进行，它兼具分子筛的作用，分辨率大大提高，是应用最广泛的电泳技术。 第二节 电泳及其应用 (2)移界电泳 电场是加在大分子溶液和缓冲溶液之间的一个非常窄的界面上，